химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

тиками (рис. 4-13)-В последние годы вместо фтординитробензола чаще применяют дансил

so2ci

Дансилхлорид ( 5-ОиметипаминонафтилсулъфонилхлориЬ )

Существует ряд способов маркировки SH-группы боковых цепей белка. Один из наиболее распространенных основан на использовании реагента Элмана •— 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота), ДТНБ [уравнение (2-28)].

Q2N—(^Q)—S—S-^Q^NQ2 + R—SH *

coo- COO"

Реагентп Элмана

cooТиоловый анион

Этот реагент количественным образом взаимодействует с —SH-rpyn-пами, образуя смешанные дисульфиды и высвобождая тиоловый анион, поглощающий свет при 412 нм, что позволяет определить содержание —SH-групп в белке. При этом, к сожалению, могут параллельно протекать дисульфидные обменные реакции с участием дополнительных молекул ДТНБ, приводящие к разрыву дисульфидных связей в белке [143]. Помимо указанных выше, имеется множество других реагентов, позволяющих модифицировать разные боковые группы в молекуле белка [138, 143а].

В случае углеводов классическим методом идентификации концевых групп служит исчерпывающее метилирование. Многократная обработка метилирующим реагентом, например диметилсульфатом, превращает все свободные ОН-группы в ОСНз-группы. Полный кислотный гидролиз с последующим разделением метилированных Сахаров и их количественным определением позволяет оценить число концевых звеньев (содержащих четыре метоксильные группы), число звеньев в неразветвленных участках цепи (содержащих по три метоксильные группы) и число точек ветвления (содержащих по две метоксильные группы). Кроме того, структура метилированных производных дает информацию о расположении связей в сахарных кольцах.

Сравнительно новым методом маркировки редуцирующих концов углеводных цепей является восстановление альдегидных групп бортри-тидом натрия (NaB3H4). Введенная таким способом радиоактивная метка дает возможность по радиоавтографам хроматограмм определять положение фрагментов, отщепленных от редуцирующих концов.

он

Одним из наиболее ценных реагентов, используемых для установления структуры углеводов, является йодная кислота (или ее натриевая соль, периодат натрия). Под действием йодной кислоты расщепляются С—С-связи, по обе стороны от которых расположены ОН-группы, с образованием диальдегидов.

НОСН.

Метод позволяет проводить количественные измерения. Через несколько часов после начала реакции избыток периодата удаляют эти-ленгликолем; можно также определить количество периодата, затраченное в процессе окисления. Если гидроксильные группы связаны с тремя идущими подряд атомами углерода, то центральный атом отщепляется в составе муравьиной кислоты, количество которой тоже можно точно определить. Помимо этого, после удаления избытка периодата диальдегид можно восстановить добавлением твердого боргидрида натрия с образованием устойчивых СШОН-групп и далее с помощью мягкого кислотного гидролиза расщепить ациклические ацетальные связи, разделить полученные фрагменты и провести их модификацию. Эту последовательность реакций называют деградацией по Смиту [144].

Пример комплексного использования нескольких методов для определения структуры сложного полисахарида приведен в табл. 2-12.

Концевые группы полирибонуклеотидов тоже отщепляют периода-том, предварительно удалив с помощью фосфомоноэстеразы фосфатные группы на З'-гидроксилах. Образующиеся диальдегиды восстанавливают далее бортритидом натрия. Другой метод включения в полинуклео-тиды радиоактивной концевой группы основан на переносе фосфориль-ной группы с молекул АТР под действием неспецифической полинуклео-тидкиназы с образованием свободной б'-гидроксильной группы полири-бо- или полидезоксирибонуклеотида [145].

Ценным методом изучения структуры ДНК является метод ближайших соседей. Он разработан А. Корнбергом с сотр. и состоит в следующем [146]. В качестве предшественников для синтеза ДНК берут какой-нибудь один радиоактивный 32Р-содержащий нуклеозидтрифос-фат [в уравнении (2-30) это дезоксиаденозинтрифосфат], а три других

J. Эту связь избирательно расщепляет а-амилаза,

2. В результате частичного гидролиза образуется ряд 6-О-метилглюкозны» олигомеров.

3. Отщепление D-глицериновой кислоты и восстановление образовавшегося конца с помощью NaB3HA позволяет в ходе последующего расщепления цепи (путем частичного кислотного гидролиза) получить набор' радиоактивных фрагментов.

4. Превращение в сложный эфир и восстановление с помощью NaB^Hi в спирт (глицерин) позволяет после частичного кислотного гидролиза получить другой набор радиоактивных фрагментов.

5. Метилирование устанавливает наличие разветвления, а пропилирование невосстанавливающих концевых группировок —? положение глюкозы. и 3-метилглюкозы.

6. По другой методике проводилось замещение О-ацильных групп на —ОСН3. Последующее окисление периодатом, восстановление с помощью ЫаВ'6Нц и гидролиз (деградация по Смиту) приводили к образованию метилированных фрагментов, идентификация которых позволила определить положение исходных ацильных групп.

а Saier М. Н., Jr., Ballou С. Е.,

страница 71
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
стул самба купить
Компания Ренессанс лестница к 005м - продажа, доставка, монтаж.

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(30.04.2017)