химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

разд. Д.2). Поскольку у дезоксирибозы нет свободной 2'-ОН-группы, ДНК в щелочной среде не разрушается.

носн2 о носн2 о „

Основание / ч. Основание

+

1 Недавно сообщалось, что лучшие результаты дает полный гидролиз в 4-1М-метан-сульфоновой кнслоге в присутствии 3-(2-аминоэтил)-нндола [131а].

Ферментативные методы гидролиза особенно ценны благодаря присущей им во многих случаях специфичности. Трипсин, представляющий собой так называемую эндопептидазу, быстро расщепляет пептидные связи лишь в том случае, если карбонильная группа расщепляемой амиднон связи принадлежит одной из основных аминокислот — лизину или аргинину. Таким образом, трипсин превращает белок в сравнительно малое число триптических пептидов, которые можно разделить и охарактеризовать. Трипсин расщепляет только денатурированные белки, причем для получения хороших результатов нужно предварительно разорвать дисульфидные мостики.

Таблица 2-11

Некоторые реакции гидролитического расщепления олигонуклеотидов3

Расщепление этой спязи под Ъвйстаием

слабых кислот ( рН 2)'дает апурииовию

у

Pv Основание

В РНК и йругих ри&онукпсатиЪах расщепление b-гпипа может идти с участием свободных 2-ОН-групп за счет нуклеофилыюй атаки фосфора

О.

Н З'-конеи

Панкреатическая рибонуклеаза делает b-разрыв справа от Пиримидина

А. Расщепление в точках а осуществляется:

1. Эндонуклеазами (по всей длине молекулы)

Панкреатическая дезоксирибонуклеаза I 2. Экзонуклеазами (только с З'-конца)

Неспецифическая диэстераза змеиного яда, атакует ДНК и РНК. Реакция идет с обязательным участием свободной З'-ОН-грушгы Б. Расщепление в точках Ъ осуществляется:

1. Случайным образом вдоль всей молекулы эндонуклеазами и щелочами (неферментативный гидролиз)

Панкреатическая рибонуклеаза расщепляет цепь только справа от

пнримидинсодержащих нуклеотидов Рибонуклеаза Т1 из Aspergillus огугае расщепляет цепь справа от

гуаиинсодержащих остатков (З'-гуанилат) Рибонуклеаза Т2 из Aspergillus oryzae расщепляет цепь справа от

аденинсодержащих остатков (З'-аденилат) Панкреатическая дезоксирибонуклеаза (ДНКаза) II Микрококковая ДНКаза

2. Экзонуклеазами (только с 5'-конца)

Фосфодиэстераза из селезенки быка гндролизует как полирибо-, так и полидезоксирибонуклеотиды

Другие ферменты, например химотрипсин и пепсин (гл. 7, раздГ.2), менее избирательны, но все же их тоже можно использовать для расщепления пептидной цепи на фрагменты с последующим определением структуры этих фрагментов. Для установления полной аминокислотной последовательности белка нужно найти «перекрывающиеся» фрагменты, содержащие последовательности, в которые входят концы двух разных триптических фрагментов. Таким путем можно «выстроить» пептиды в том порядке, в котором они расположены в нативном белке.

Рассмотрим теперь метод пептидных карт. Его первый этап состоит в разрыве дисульфидиых связей, далее белок денатурируют и расщепляют ферментами, например трипсином или пепсином. В результате получается набор пептидов, размер и аминокислотный состав которых характерен для каждого отдельного белка. Смесь пептидов наносят на лист хроматографической бумаги и проводят в одном направлении хроматографию, а в другом — электрофорез. Пептиды локализуются в виде отдельных пятен, образуя характерную картину («отпечатки пальцев»). Метод пептидных карт особенно полезен для выявления малых

а В таблицу включены реакции, затрагивающие как РНК, так и ДНК. 6 Символ Р в кружочке здесь означает группу—РОг—.

различий в структуре белка, например различий между генетическими разновидностями одного и того же белка (рис. 4-20).

Некоторые ферменты катализируют последовательное отщепление аминокислот с одного или другого конца пептидной цепи. Карбоксипеп-тидазы отщепляют аминокислоты с карбоксильного конца, а аминопеп-тндазы атакуют противоположный конец. Используя хроматографиче-ские методы, можно определить, какие аминокислоты были отщеплены этими ферментами в заданные моменты времени, и получить представление о последовательности аминокислот на концах цепи.

Полное ферментативное расщепление белков проводят с помощью смеси ферментов, которую составляют протеазы, синтезируемые грибами (проназы). Однако ферменты смеси расщепляют еще и друг друга, так что в общем случае для количественного расщепления белка на составляющие его аминокислоты ферментативный гидролиз не годится. Один из новых методов основан на применении гидролитических ферментов, иммобилизованных на колонках с агаровым гелем. Гидролизуе-мый белок пропускают через гель, после чего на дне колонки скапливаются составляющие его аминокислоты [132].

Экзонуклеазы отщепляют нуклеотиды с концов полинуклеотидных цепочек, в то время как эндонуклеазы делают разрывы внутри цепи. Одни из них гидролизуют лишь одноцепочечные молекулы, другие — двухцепочечные. Некоторые нуклеазы разрывают обе цепи ДНК, тогда как другие «надрезают» молекулу, внося разрыв лишь в одну из цепей. Специфичность ряда нуклеаз отражена в табл. 2-11. Частичный ферментативны

страница 67
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Магазин КНС цифровые решения 90NB0BBJ-M04870 - офис-салон на Дубровке.
купить детскую экипировку для легкой атлетики
электропривод belimo lf230
компьютерные курсы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.04.2017)