химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

ужают в сосуд с керосином. Электрофоретическое разделение больших количеств материала проводится в плоских лотках, заполненных крахмальным или каким-либо другим гелем. Одним из наиболее распространенных и чувствительных методов разделения белков является электрофорез в колонке, заполненной полиакриламидным гелем. Этот метод, в настоящее время сильно усовершенствованный, позволяет проводить разделение молекул одновременно и по размеру, и по электрическому заряду; его называют методом электрофоретического молекулярного сита [127, 128].

При изоэлектрическом фокусировании в вертикальной колонке между анодом и катодом электрохимически создается градиент рН. Градиент рН стабилизируется градиентом плотности, чаще всего сахарозным; вся система тщательно термостатируется. Белки в колонке движутся в направлении, соответствующем их изоэлектрической точке, где «фокусируются» в виде очень узкой полосы. Две соседние полосы могут быть разделены интервалом всего лишь в 0,01 единицы рН. Считается, что изоэлектрические точки белков в обычных экспериментальных условиях близки к их изоионным точкам, т. е. к тем значениям рН, при которых белки остаются изоэлектрическими в условиях полного отсутствия добавленного электролита [129].

Чрезвычайно важным методом разделения, связанным с наличием электрических заряженных групп, является ионообменная хроматография. Обычно применяются водные растворы смесей и колонки, наполненные ионообменной смолой — пористым веществом, содержащим

связанные ионные группы, например —SO3, —COO-, —NH3, или четвертичные атомы азота. Для разделения малых молекул, как правило, берут синтетические смолы, основу которых составляет полистирол с поперечными сшивками. Для крупных молекул больше подходят произI | I I I I i I 1 I 1 1 .—I—

О 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 110 120

Время элюирования, мин

РИС. 2-36. Результат ионообменной хроматографии смеси аминокислот в аминокислотном анализаторе. Смесь аминокислот (по 0,5 нмоль каждой) нанесли на колонку диаметром 0,9 см и длиной 58 см, заполненную мелкими частицами полнстирол-сульфона-та (Durrum тип DC-4A), и элюировали ее цитратным буфером при трех значениях рН. последовательно возраставших от 3,5 до 6,4. Проходящий через колонку раствор обрабатывали флуорескамином (стр. 180) и затем непрерывно регистрировали флуоресценцию образовавшегося продукта. (С любезного разрешения Durrum Chemical Corp.)

водные целлюлозы или поперечносшитых декстранов (сефадекс). Соединения с положительно заряженными группами, например аминокислоты в кислом растворе, наносят на колонку с катионообменной смолой, скажем дауэкс 50, которая содержит диссоциированные группы сульфоновой кислоты. Адсорбированные аминокислоты элюируют раствором НС1 или буфером с возрастающим значением рН. Процесс такого типа лежит в основе автоматического количественного анализа смесей аминокислот, образующихся в результате гидролиза белков или пептидов (рис. 2-36). На сульфонат-замещенном полистироле можно разделять также пуриновые и пиримидиновые основания. Отрицательно заряженные нуклеотиды обычно разделяют на смолах, содержащих четвертичные основания [130]. Разработан вариант этого метода для

разделения очень малого количества материала; например, можно количественно определять содержание каждого из нуклеотидов в препарате митохондрий из печени крысы, содержащем 5—8 мг белка [131].

2. Гидролиз

Почти все биополимеры по своей природе нестабильны и в реакции с водой распадаются на мономерные звенья (гидролизуются). Гидролиз катализируют протоны, ионы гидроксила и ферменты. Механизмы гидролиза рассматриваются в гл. 7. Гидролиз может быть полным или частичным, неспецифическим или, напротив, направленным на определенные связи в молекуле полимера.

Полный гидролиз белков обычно проводят путем нагревания при температуре около 110° в атмосфере N2 в присутствии б н. НС1 в течение 12—96 ч. Некоторые аминокислоты, в особенности триптофан, при этом разрушаются. По существу, методика проведения идеального полного гидролиза отсутствует1. Полный гидролиз белков можно осуществить с помощью основных катализаторов, но при этом наблюдается значительная рацемизация аминокислот.

Нуклеиновые кислоты тоже гидролизуют сильной кислотой. Например, нагревания в течение 1 ч при 100 °С в 12 н. хлорной кислоте достаточно для расщепления молекулы до составляющих ее оснований. Б ДНК N-гликозидные связи более лабильны, чем в РНК, связи с пуринами более лабильны, чем с пиримидинами. Последнее обстоятельство позволяет провести весьма полезную операцию: если оставить ДНК на ночь на холоду при рН 2, произойдет полная ее апуринизация. Образующийся полимер известен как апуриновая кислота (табл. 2-11).

Щелочной гидролиз РНК Дает смесь 2'- и З'-нуклеотидов. Механизм этого процесса связан с участием свободных 2'-ОН-групп рибозы и образованием циклических 2/,3'-фосфатов и аналогичен механизму действия панкреатической рибонуклеазы (гл. 7,

страница 66
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
встраиваемая акустика в потолке для домашнего кинотеатра
сертификат на покупку косметики
купить контактные линзы bausch lomb
тумба эко кожа

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(15.12.2017)