химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

2-19)

та, тиДролизующего ДНК) с помощью хроматографии на колонке с ат'ярозой, содержащей следующую труппу [120]:

TtjMUH

г. Разделение, основанное на размерах молекул

Диализ [121] и ультрафильтрация [122] основаны на применении в качестве полупроницаемого барьера тонкой мембраны (например, из-ацетата целлюлозы — целлофана), имеющей поры диаметром 1—10 нм (чаще всего 5 нм). Малые молекулы такая мембрана пропускает, а крупные задерживает. Диализ определяется диффузией, и его можно'

1 Коммерческое название продукта, производимого Фирмой Pharmacia Fine Chemicals, Uppsala, Sweden.

ускорить перемешиванием раствора, а скорость фильтрования зависит от разности давлений по разные стороны мембраны. Более сложный) характер имеет гель-фильтрация [123]. Колонку наполняют материалом типа декстрана с большим числом поперечных сшивок (сефадекс1);. обычно он имеет вид спрессованных мягких шариков. Шарик представляет собой трехмерную сеть из углеводных цепей (рис. 2-18). Пространство между цепями (оно зависит от числа сшивок, образующихся; в геле при его химической обработке) недостаточно для проникновения туда крупных молекул, но в нем вполне могут задерживаться малые молекулы. При пропускании через такую колонку смеси разных моленений типа простых циклических Сахаров. Сефадекс G-200 с гораздо меньшим числом поперечных сшивок применяется для разделения макромолекул, мол. вес которых лежит в интервале 5000—200 000.

д. Центрифугирование

Самые разнообразные методы разделения связаны с использованием препаративных центрифуг [124, 125]. Скорость седиментации молекул в центробежном поле зависит от формы и размеров молекул. Каждая молекула характеризуется своей константой седиментации s, выражаемой в единицах Сведберга, S. Когда же в центрифуге устанавливается седиментационное равновесие, то главным фактором, определяющим, где в итоге окажутся частицы, становится их плотность.

Для грубого предварительного разделения клеточных фрагментов достаточно кратковременного последовательного центрифугирования при нескольких разных скоростях (с разным центробежным ускорением) (разд. 3.1. а). Однако, чтобы получить максимально чистые препараты органелл или молекул, используют центрифугирование в градиенте плотности. Например, для разделения РНК на несколько фракций, различающихся по константам седиментации, сначала в пластмассовой центрифужной пробирке создают градиент концентраций раствора сахарозы (от 25% на дне до 5% на поверхности). Затем сверху аккуратно наслаивают препарат РНК и проводят центрифугирование с очень высокой скоростью в течение нескольких часов. Препарат РНК разделяется на ряд медленно седиментирующих резких полос, стабилизируемых градиентом сахарозы. Затем пробирку прокалывают снизу и собирают фракции по каплям в пробирки с помощью коллектора фракций. Далее определяют положение каждой фракции и содержание в ней РНК.

При достаточно большом времени центрифугирования частицы достигают в градиенте плотности равновесных положений. Именно та-(Ким образом в соответствии с их плотностью в градиенте сахарозы разделяют клеточные -органеллы (гл. 1, разд. Б.6). Макромолекулы (на

пример, ДНК) чаще всего разделяют в градиенте CsCI [126]. В плотных солевых растворах градиенты достаточно устойчивы, и для лучшего разделения применяются очень сильные центробежные поля. В результате можно отделить одноцепочечную ДНК от двухцепочечной или разделить препараты ДНК с разным GC-содержанием. Последнее основано на различиях в плавучей плотности р таких ДНК в растворе CsCI, которая меняется с GC-содержанием в соответствии со следующим приближенным уравнением:

р = 1,660 + 0,098 • (мольная доля GC-nap).

е. Электрический заряд

В основе ряда методов разделения молекул лежит различие в суммарном заряде, который они несут при данном рН среды. Этот суммарный заряд для многих соединений легко оценить по числу содержащихся в них кислых и основных групп. Предположим, что нам известны значения р/Са каждой группы и степень ее диссоциации при данном рН. При некотором рН, называемом изоэлектрической точкой, суммарный заряд молекулы становится равным нулю — в электрическом поле она не перемещается. При любом другом значении рН молекула будет двигаться к аноду ( + ) или катоду (—).

Электрофорез, процесс разделения молекул, основанный на разной скорости перемещения их в электрическом поле, проводят самыми разными способами. Очень небольшое количество раствора, содержащего смесь белков (например, белков сыворотки крови), наносят в виде тонкой полоски на лист фильтровальной бумаги или ацетата целлюлозы. Лист насыщают буфером и пропускают через него электрический ток. Напряжения в несколько сот вольт достаточно для разделения белков сыворотки в течение 1 ч. Для ускорения процесса и снижения диффузии низкомолекулярных веществ широко используют высоковольтный электрофорез. Прикладываемое напряжение составляет в этом случае 2—3 тыс. вольт. Образец постоянно охлаждают с помощью термостатируемых пластин; иногда для той же цели всю систему погр

страница 65
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аренда видеопроектора москва
Компания Ренессанс лестница г-образная - цена ниже, качество выше!
стулья изо для офиса
бизнес складское хранение вещей в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(10.12.2016)