химический каталог




Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1

Автор Д.Мецлер

х и тканях, причем зачастую концентрация этого вещества в ткани бывает весьма низкой. Затем молекулы соединения необходимо разрушить и полученные фрагменты разделить, очистить и идентифицировать. Для определения относительного содержания компонентов проводят точный количественный анализ. Далее уже нужна известная изобретательность, чтобы собрать из всех фрагментов единое целое и установить структуру исходных молекул.

а. Фракционирование клеток [105—ПО]

Исходным материалом при фракционировании может служить свежая ткань или осадок спрессованных клеток микроорганизма, обычно получаемый с помощью центрифугирования.

Ткань измельчают либо в мясорубке, либо, если нужна более мягкая обработка, в гомогенизаторе1. Клетки микробов чаще всего разрушают с помощью ультразвука или продавливанием через пресс под высоким давлением. При фракционировании очень важно подобрать нужное значение рН и состав буфера, а при выделении субклеточных орга-нелл — осмотическое давление. Для сохранения целостности органелл часто в качестве суспендирующей среды используют 0,25 М сахарозу, к которой добавляют MgCl2, а также реагент, образующий комплекс с металлами, например этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) (табл. 4-2). Растворимые ферменты обычно экстрагируют без добавления сахарозы, но при этом используют восстановители — глутатион (дополнение 7-Б), меркаптоэтанол или дитиотреитол (разд. 3.3.а).

1 Наиболее широко используется гомогенизатор, представляющий собой цилиндрический патрон, внутри которого вращается довольно плотно прилегающий к стенкам стеклянный или пластиковый поршень.

Полученный сырой гомогенат процеживают и обычно центрифугируют непродолжительное время, чтобы удалить фрагменты клеток и прочие «осколки». Клеточные органеллы, как правило, отделяют центрифугированием [106, 107]. Одна из методик подобного рода состоит в следующем. Гомогенат в 0,25 М сахарозе (изотоничной по отношению к большей части клеток) центрифугируют в течение 10 мин при 600—

1000 g, что позволяет осадить ядра и целые клетки. Затем надосадоч-ную жидкость центрифугируют еще 10 мин при ~ 10 000 g", в результате чего осаждаются митохондрии и лизосомы. Наконец, центрифугирование в течение часа при ~ 100 000 g дает микросомный осадок. Каждый из разделенных компонентов можно затем снова суспендировать и повторно центрифугировать, чтобы получить более чистый препарат органелл данного типа. Осажденные частицы во многих случаях растворяют с помощью химической обработки, например добавляя детергенты. Супернатант (надосадочная жидкость), остающийся после центрифугирования с максимальной скоростью, служит исходным материалом для выделения растворимых ферментов и многих низкомолекулярных соединений.

б. Разделение, основанное на разной растворимости компонентов системы

Некоторые фибриллярные белки практически нерастворимы в воде, так что все остальные компоненты препарата можно удалить растворением. Растворимые белки чаще всего осаждают из водных растворов путем высаливания, которое сводится к добавлению большого количества соли, например сульфата аммония. Разные белки осаждаются при разных концентрациях соли, поэтому можно отделить фракцию белков, осаждающихся в заданном интервале концентраций, а затем очищать эту фракцию дальше. Методы, основанные на таком поэтапном осаждении, широко используются как первый шаг очистки, поскольку они позволяют получать сразу большие количества материала.

РНК чаще всего получают обработкой препарата фенолом, насыщенным водой, в котором осаждаются все белки. При определенных условиях иногда удается удалить и ДНК. Последовательные стадии осаждения и экстрагирования позволяют отделить РНК от полисахаридов (в водном слое), ДНК (если она имеется) и других компонентов [111 —113]. Нуклеиновые кислоты можно отделить от белков, удаляя последние с помощью протеолитических ферментов.

Некоторые углеводы, например целлюлоза и гликоген, устойчивы к кипячению в щелочи, и это позволяет удалить все другие компоненты смеси. Липиды экстрагируют из тканей неполярными растворителями [114], например смесью СНС13 и СН3ОН в соотношении 2:1.

е. Разделение, основанное на распределении соединений между разными фазами

Многие наиболее важные методы разделения основаны на многократном распределении соединений между двумя разными фазами, из которых хотя бы одна обычно является жидкой. Малые молекулы можно разделить с помощью противоточного распределения, когда препарат многократно уравновешивается между двумя жидкими фазами, причем одна из фаз более полярна, чем другая. После каждого уравновешивания с помощью специального устройства «противоточиым» образом вводятся новые порции обеих жидкостей [115].

В качестве одной из фаз можно использовать порошок или мелкие частицы; ими заполняют вертикальную колонку или наносят их тонким слоем на стеклянную пластинку. Все эти методы называются хромато-графическими — термин, предложенный М. Цветом, который впервые в 1903 г. описал разделение пигментов, присутствующих в листьях растений (хлорофилла и ка

страница 63
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176

Скачать книгу "Биохимия. Химические реакции в живой клетке. Том 1" (5.5Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
реле потока ab industrietechnik sf1
колесоотбойник ко-2
кровать аскона с подъемным механизмом
Компания Ренессанс пожарная лестница цена - оперативно, надежно и доступно!

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.08.2017)