химический каталог




Государственная фармакопея СССР. Выпуск 2

Автор М.Д.Машковский, Э.А.Бабаян, А.Н.Обоймакова, В.М.Булаев и др.

оптическую плотность растворов при 595 нм.

6. Определение белка по методу Седмака

Принцип метода тот же, что и в методе Бредфорд. Метод применим для определения суммарного количества белков и полипептидов с молекулярной массой более 3000 дальтон.

1,5 мл раствора препарата, содержащего 0,010—0,150 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 1,5 мл раствора кумасси ярко-голубого G-250, перемешивают и выдерживают при комнатной температуре в течение одинакового времени в интервале от 5 мин до 3 ч. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при двух длинах волн: 620 и 465 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата и кумасси ярко-голубого G-250.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,005 до 0,150 мг стандартного образца белка, измеряя оптическую плотность растворов при 620 и 465 нм и откладывая по оси ординат отношение оптических плотностей (D620/D465), по оси абсцисс — соответствующие значения концентрации растворов стандартного образца белка.

7. Определение белка по методу Флореса

Метод основан на образовании окрашенного в синий цвет комплекса белка с красителем бромфеноловым синим. Комплекс устойчив в течение 8 ч.

0,1 мл раствора препарата, содержащего 0,01—0,08 мг испытуемого белка, помещают в пробирку, прибавляют 0,9 мл раствора бромфенолового синего, выдерживают при комнатной температуре в течение одинакового времени в интервале от 10 мин до 8 ч. Оптическую плотность измеряют на спектрофотометре при длине волны 610 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют смесь этих же реактивов без препарата.

Калибровочный график строят в пределах концентраций от 0,01 до 0.08 мг стандартного образца белка (почти прямолинейная зависимость), измеряя оптическую плотность растворов при 610 нм.

II. С п е к т р о ф о т о м е т р и ч е с к и й метод определения белка

Спектрофотометрический метод определения белка основан на способности ароматических аминокислот (триптофан, тирозин и в меньшей степени фенилаланин) поглощать ультрафиолетовый свет с максимумом поглощения при 280 нм.

Условно принято считать, что при концентрации белка в растворе, равной 1 мг/мл, величина оптической плотности при 280 нм равна 1 при использовании кюветы с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют растворитель препарата.

Концентрация испытуемого белка в растворе должна быть от 0,05 до 2 мг/л.

Определению белка данным методом мешают присутствие нуклеиновых кислот и нуклеотидов (более 20 %). В этом случае оптическую плотность одного и того же раствора измеряют при двух длинах волн — 260 и 280 нм; содержание белка X (мг/мл) рассчитывают по формуле Калькара:

X =1,45- D2m — 0,74- DnBIII. Определение белка по содержанию общего азота

Определение белка по содержанию общего азота основано на том, что содержание азота в большинстве белков практически одинаково и может быть принято равным 16 %. В том случае, если лекарственный препарат, кроме белка, содержит другие вещества, в состав которых входит азот, белок предварительно осаждают трихлоруксусной или хлорной кислотой. При нагревании органического соединения с концентрированной серной кислотой происходит его минерализация, азот превращается в аммония сульфат, и его можно определить количественно.

1. Микрометод Кьельдаля

Определение проводят в соответствии со статьей «Опреде-ление азота в органических соединениях» (ГФ XI, вып. 1, с. 180) со следующими дополнениями: навеску препарата, содержащую 10—20 мг испытуемого белка, помещают в колбу «в», затем j осторожно прибавляют 0,25 г растертой смеси калия сульфата, меди сульфата и натрия селената, взятых в соотношении 20:5:8,5, и 2 мл концентрированной серной кислоты. Проводят минерализацию, нагревая колбу на горелке или плитке, пока .; раствор не станет прозрачным. После этого продолжают нагревание еще в течение 30 мин. В конце минерализации, когда \ вся вода испарится, прибавляют 1—2 капли пергидроля и про32

2—1739

33

должают нагревание в течение 10 мин до обесцвечивания раствора. Отгон титруют раствором хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л).

Параллельно проводят контрольный опыт.

Разность между количеством миллилитров раствора хлористоводородной кислоты (0,01 моль/л) в испытуемом и контрольном опытах, умноженная на 0,14 г, соответствует количеству миллиграммов азота во взятой навеске. Принимая содержание азота в белке равным 16 %, по количеству найденного азота рассчитывают количество белка в опытной пробе.

2. Определение белка с реактивом Несслера

Навеску препарата, содержащую около 10 мг белка, минерализуют по способу, описанному в микрометоде Кьельдаля. После минерализации пробу количественно переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят объем раствора водой до метки.

0,5—1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл воды, 2 мл реактива Несслера и доводят объем раствора водой до ме

страница 12
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173

Скачать книгу "Государственная фармакопея СССР. Выпуск 2" (8.36Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
где можно оставить вещи на хранение в москве
подарок из москвы
лучшие наборы кастрюль
закончить курсы в омске кадровик

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)