химический каталог




Государственная фармакопея СССР. Выпуск 2

Автор М.Д.Машковский, Э.А.Бабаян, А.Н.Обоймакова, В.М.Булаев и др.

т — концентрация образовавшегося

продукта.

Рис. 2. Зависимость скорости реакции v от концентрации субстрата (S). а — концентрация субстрата; б — фермент, для которого характерно ингнбирование субстратом.

кривая ферментативной реакции приведена на рис. 1. Для каждой ферментативной реакции могут быть подобраны условия, при которых начальный участок кривой линеен, т. е. зависимость концентрации образовавшегося продукта или израсходованного субстрата от времени наблюдения (t) имеет прямо пропорциональный характер.

Под начальной скоростью реакции в этих условиях понимают скорость, соответствующую линейному участку, и определяют ее как тангенс угла наклона этого участка.

Поскольку длительность прямолинейного участка кинетической кривой от опыта к опыту несколько изменяется, время инкубации должно составлять не более 70 % и не менее 20 % времени соответствующего прямолинейного участка.

2. Концентрация субстрата ([S]). Скорость реакции зависит от концентрации субстрата вплоть до его насыщающей концентрации. Под насыщающей концентрацией понимают такую концентрацию субстрата, при которой скорость реакции перестает повышаться при дальнейшем увеличении концентрации субстрата (рис. 2, а). При проведении ферментативной реакции реакционная смесь должна содержать такое количество субстрата, которое обеспечит насыщение фермента в течение всего хода определения (количество субстрата, взятого для проведения ферментативной реакции, должно быть примерно на 30 % выше значения точки насыщения).

26

27

ведена на рис. 4. Активность следует определять при оптимальном значении рН. Оптимальное значение рН должно быть определено при выбранных значениях концентрации фермента и насыщающей концентрации субстрата, температуре (37 + 0,1) °С и использовании буферного раствора того состава, который не ингибирует фермент.

После выбора оптимального значения рН необходимо проверить, сохраняется ли при этом рН линейная зависимость [Р] от t при выбранных значениях концентрации фермента и насыщающей концентрации субстрата.

6. Кофакторы. Существуют ферменты, для проявления каталитических свойств которых необходимо присутствие кофакторов, например коферментов — производных витаминов, ионов металлов и др.

Для определения оптимальной концентрации кофактора следует построить кривую зависимости скорости реакции от концентрации кофактора, аналогичную зависимости скорости реакции от концентрации субстрата, и по этой кривой выбрать насыщающую концентрацию кофактора.

После выбора насыщающей концентрации кофактора необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [Р] от t.

Конкретные параметры ферментативной реакции указываются в частных статьях.

МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОЙ РЕГИСТРАЦИИ СКОРОСТИ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ РЕАКЦИИ

Скорость ферментативной реакции количественно можно измерить по убыли субстрата или по образованию продукта реакции. Предпочтительнее регистрировать скорость образования продукта, поскольку это обеспечивает большую точность определения.

Для количественной регистрации скорости ферментативной реакции используют методы, связанные с отбором проб из реакционной смеси, и регистрирующие методы, основанные чаще всего на спектральных свойствах субстрата или продукта реакции.

Определение белка

Определение содержания белка в препарате проводят одним из методов, приведенных в общей статье «Определение белка».

ЕДИНИЦЫ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИ

Активность ферментов выражается в Международных единицах (ME) или единицах действия (ЕД).

ME — это такое количество фермента, которое при заданных условиях катализирует превращение одного микромоля субстрата

28 за 1 мин (или одного микроэквивалента затронутых реакцией групп в тех случаях, когда атакуется более одной группы в каждой молекуле субстрата).

ЕД — это условная единица, величина которой указывается в частных статьях.

Нормируются:

Удельная активность препарата — выражается в единицах ферментативной активности фермента (ME или ЕД) на 1 мг препарата и на 1 мг белка (вторая величина характеризует чистоту препарата).

Доза выражается в единицах ферментативной активности (ME или ЕД) на единицу лекарственной формы.

Определение активности ферментных препаратов в сравнении со стандартным образцом

С целью снижения погрешности методов определения ферментативной активности необходимо проводить определение ферментативной активности препарата в сравнении со стандартным образцом. Стандартным образцом является высокоочищенный ферментный препарат, качество которого отвечает требованиям соответствующей нормативно-технической документации.

Определение ферментативной активности испытуемого препарата и стандартного образца проводят в одинаковых условиях опыта.

Активность препарата (Л) в соответствующих единицах (ME или ЕД) вычисляют по формуле:

л— Лс- Я,- К А~ а, •

где Ас — ферментативная активность стандартного образца в единицах (ME или ЕД) на миллиграмм белка или препарата; Пс — величина измеряемого параметра для стандартного образца; Яр — величина

страница 10
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173

Скачать книгу "Государственная фармакопея СССР. Выпуск 2" (8.36Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
волная терапия
зеркало купить в москве дешево
Dell Vostro 3667-7512
взять в аренду экран для кинотеатра

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(11.12.2017)