химический каталог




Клинические лабораторные исследования

Автор А.Я.Любина Л.П.Ильичева Т.В.Катасонова С.А.Петросова

мала, расщепленного 1 л сыворотки (или мочи) за 1 ч инкубации при 37° С. Расчет производят по формуле:

хА^.2-8-ю=^=. 160,

где х—активность амилазы; Ек — экстинкция контрольной пробы; Еса—экстинкция опытной пробы; 2 — количество крахмала, введенное в пробу, мг; 8 — коэффициент пересчета на 1 ч инкубации; 10—коэффициент пересчета на , 1 мл сыворотки или мочи.

Полученный ответ в мг/(ч-мл) численно равен ответу в г/(ч-л).

В норме активность а-амилазы в сыворотке крови — 12—32 г/(ч-л), в моче 20—160 г/(ч-л).

§ 119. Определение активности аланинаминотрансферазы в сыворотке крови1

Аланинаминотрансфераза катализирует обратимую реакцию переноса аминогруппы с DL-аланина на «-кетоглутаровую кислоту с образованием пировиноград-ной и L-глутаминовой кислот. Пировиноградная кислота взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином в щелочной среде с образованием динитрофенилгидразона пирови-\ ноградной кислоты красного цвета. Интенсивность окраски пропорциональна количеству образовавшейся пирови-ноградной кислоты. По количеству образованной пирови-ноградной кислоты судят об активности АлАТ.

Реактивы: 1) 0,1 М фосфатный буфер, рН 7,4 (предварительно готовят 2 раствора: а) 17,4 двузамещенного фосфата натрия ИагНРОг^НгО растворяют в 1л дистиллированной воды; б) 13,6 г однозамещенного фосфата калия КН2РО4 растворяют в 1 л дистиллированной воды. Для получения буферного раствора смешивают 840 мл раствора а и 160 мл раствора б; полученный раствор должен давать с индикатором бромтимоловым синим голубую окраску);

2) субстратный раствор (29,2 мг а -кетоглутаровой кислоты и 1,78 г DL-аланина отвешивают на аналитических весах, растворяют в 1н. растворе едкого натра, добавляя его небольшими порциями до полного растворения навесок и получения рН 7,4; раствор переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, ополаскивают посуду, в которой растворялись навески, 0,1 М фосфатным буфером и доливают им до метки; приготовленный раствор тщательно перемешивают, прибавляют 1 каплю хлороформа); хранят в хблодильнике в замороженном виде;

Метод Райтмана и Френкеля.

249

3) раствор 2,4-динитрофенилгидразина (19,8 мг сухого вещества растворяют в небольшом количестве 1 н. раствора хлористоводородной кислоты при нагревании на водяной бане в мерной колбе вместимостью 100 мл; после охлаждения доводят объем хлористоводородной кислотой до метки); фильтруют через 24 ч, хранят в склянке темного стекла в холодильнике;

4) 0,4 н.раствор едкого натра;

5) стандартный раствор пирувата натрия СНзСОСОONa (11 мг кристаллического пирувата натрия растворяют

в небольшом количестве дистиллированной воды, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят до

метки водой); 1 мл раствора содержит 110 мкг пировиноградной кислоты; раствор используют для построения

калибровочного графика.

Ход определения. В пробирку вносят 0,5 мл субстратного раствора и нагревают при 37° С в течение 5 мин. Добавляют 0,1 мл сыворотки и помещают в термостат при 37° С на 30 мин. Затем вносят 0,5 мл раствора динитрофе-нилгидразина, оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Приливают 5 мл 0,4 н. раствора едкого натра, тщательно перемешивают, оставляют для развития окраски на 10 мин при комнатной температуре.

Экстинкцию измеряют на ФЭКе с зеленым светофиль- ] тром (530 нм) в кювете с толщиной слоя 10 мм против ' контроля. Контроль ставят как опыт, но раствор динитро-фенилгидразина добавляют до инкубации.

Расчет активности фермента производят по калибро- I вочному графику, показывающему зависимость оптиче-' ской плотности от содержания пировиноградной кислоты.

Построение калибровочного графика. Из) стандартного раствора пирувата натрия готовят ряд-разведений, как указано в табл. 12.

Таблица 12. Схема разведения стандартного раствора

Содержание пировиноградной кислоты

Раствор пирувата натрия.

ЛробирКИ

Дистиллированная веда, мл

0,55 4,4 0,05

0,50 8,8 0,10

0,45 13,2 0,15

0,40 17,7 0,20

0,35 22,0 0,25

0,30 26,4 0,30

0,05 0,10 0,15 0,20 0,25 0,30

Количество микромолей пировиноградной кислоты на 1 л сыворотки за 1 ч инкубации

1,0

В пробирку с разведенным пируватом натрия приба ют по 0,5 мл раствора динитрофенилгидразина, далей

250

2,0 3,0 4,0 5,0 6,0 пробы обрабатывают как опытные. Измеряют экстинкцию на ФЭКе при тех же условиях, что и опыт, но вместо контроля используют дистиллированную воду.

С-2 10

Пересчет активности АлАТ в микромоли пировиноградной кислоты, образовавшейся при инкубации 1 л сыворотки в течение 1 ч, производят по калибровочному графику

или по формуле: АлАТ;

где С—пировиноградная кислота, найденная по калибровочному графику, мкг; 10 — коэффициент пересчета на 1 мл сыворотки; 2 —коэффициент пересчета на 1 ч инкубации; 88 — масса 1 мкмоля пировиноградной кислоты, мкг.

В норме активность АлАТ составляет 0,1—0,68 мкмоль пировиноградной кислоты на 1 л сыворотки за 1 ч инкубации при 37° С.

Глава III УГЛЕВОДНЫЙ ОБМЕН

ПОКАЗАТЕЛИ, ХАРАКТЕРИЗУЮЩИЕ СОСТОЯНИЕ УГЛЕВОДНОГО ОБМЕНА

§ 120. Краткие сведения об

страница 93
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108

Скачать книгу "Клинические лабораторные исследования" (2.84Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
склады кладовки
купить абортные таблетки
информационная доска изготовление самара
нео космо цветные линзы грэй нулевки купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)