ении одинаковой окраски в контрольной и опытной пробах отмечают количество израсходованного стандартного (рабочего) раствора и производят расчет по формуле:

3-х -100,05 „,л 0 2 0 5 ~150х мг/100 мл азота,

где х—количество стандартного рабочего раствора, пошедшего, на титрование, мл; 3 — количество исходной смеси (0,2 мл крови и 2,8 мл реактива для осаждения белка, мл); 0,2 — количество крови в 3 мл исходной смеси, мл; 0,5 — количество центрифугата, взятого в опыт, мл; 0,05—количество азота, содержащегося в 1 мл стандартного рабочего раствора, мл.

Измерения производят на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 5 мм против контроля при фиолетовом светофильтре (440—450 нм). Параллельно с опытными пробами обрабатывают стандартную пробу (0,2 мл стандартного раствора, 0,05 мл концентрированной серной кислоты, 0,3 мл 50% раствора едкого натра, 0,5 мл реактива Несслера и 9,8 мл дистиллированной воды). Стандартную пробу измеряют при тех же условиях, что и опытные (окраска устойчива в течение 15—20 мин). Контроль ставится, как стандартные пробы, но вместо сульфата аммония добавляют воду. Расчет производят по формуле:

Дол зо-нод

'-'СТ ^СТ

где Сп—концентрация остаточного азота, мг/100 мл; Еж—экстинкция опытной пробы; С„—концентрация остаточного азота в стандарте, 30 мг/100 мл; Ест — экстинкция стандартной пробы.

Норма остаточного азота составляет 20—40 мг/100 мл. Коэффициент пересчета в единицы СИ (ммоль/л) равен 0,7140.

234

§ 112. Определение мочевины в сыворотке крови и моче по цветной реакции с диацетилмонооксимом

Мочевина в кислой среде образует с диацетилмонооксимом в присутствии тиосемикарбазида и солей железа окрашенные соединения, интенсивность окраски которых прямо пропорциональна содержанию мочевины в сыворотке крови и в моче.

Реактивы: 1)' 10% раствор трихлоруксусной кислоты;

2) 2,5% водный раствор диацетилмонооксима (реактив стоек);

3) 0,25% водный раствор тиосемикарбазида или 0,32% водный раствор хлорида тиосемикарбазида; оба реактива ?стабильны при хранении в темной посуде при комнатной температуре;

4) основной 5% раствор хлорного железа (5 г хлорного железа растворяют в 100 мл дистиллированной воды и подкисляют добавлением 1 мл концентрированной серной кислоты); из основного раствора готовят рабочий раствор (1 мл основного раствора доводят до объема 100 мл дистиллированной водой, затем добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85% ортофосфорной кислоты); хранят в темном месте; годен в течение 2 нед;

5) цветной реактив (к 30 мл рабочего раствора хлорного железа добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5% раствора диацетилмонооксима и 0,25 мл 0,25% раствора тиосемикарбазида); готовят каждый раз перед употреблением;

6) стандартный раствор мочевины (1 г мочевины растворяют в 100 мл растворителя). В качестве растворителя можно использовать дистиллированную воду или 0,2% раствор бензойной кислоты. Стандарт, приготовленный на основе бензойной кислоты, более стабилен, чем водный. При работе оба раствора должны давать небольшие колебания экстинкции. В противном случае следует приго-товить новый стандартный раствор. 1 мл стандартного раствора содержит 1 мг мочевины.

Ход определения в сыворотке крови. В центрифужную пробирку вносят 0,8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки и 1 мл 10% раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают. Через 15—20 мин смесь центрифугируют.

В чистую пробирку вносят 0,5 мл надосадочной жидкости и 5 мл цветного реактива. Пробирку выдерживают в кипящей водяной бане в течение 20 мин, затем охлаждают 2—3 мин под водопроводной водой. Измерение проводят на ФЭКе при длине волны 500—560 нм (зеленый свето235

фильтр) против контрольной пробы в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Контрольную пробу ставят так же, как опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл дистиллированной воды.

В стандартную пробу вносят вместо сыворотки 0,2 мл стандартного раствора мочевины, далее определение проводят как опытное. Расчет производят по формуле:

где х—концентрация мочевины, мг/100 мл; Еоа— экстинкция опытной пробы; Е„— экстинкция стандартной пробы; 100 — концентрация мочевины в стандартном растворе, мг/100 мл;

•100-0,1665=

Коэффициент пересчета в единицы СИ (ммоль/л) равен 0,1665, отсюда:

?16,65 ммоль/л.

Норма мочевины в сыворотке крови 3,33—8,32 ммоль/л.

Ход определения в моче. Перед определением профильтрованную мочу (из суточного количества) разводят изотоническим раствором хлорида натрия в соотношении 1:25 илн 1:50. Определение производят также, как в сыворотке крови, но вместо сыворотки берут 0,2 мл разведенной мочи. Параллельно обрабатывают стандартную пробу, как и для определения мочевины в сыворотке крови.

Расчет мочевины на суточное количество мочи производят по следующей формуле: I

х _CCT-gong-g Ест-б-1000 '

где х—количество мочевины в суточной моче, г; ?<,„ — экстинкция опытной пробы; Ест — экстинкция стандартной пробы; Сет — количество мочевины в стандартной пробе, мг; а—суточное количество мочи, мл; б—количество мочи, взятое