химический каталог




Клинические лабораторные исследования

Автор А.Я.Любина Л.П.Ильичева Т.В.Катасонова С.А.Петросова

0 мл дистиллированной воды в химическом стакане, добавляют 1,84 г барбитала и нагревают на водяной бане при помешивании до растворения; после охлаждения переносят в мерную колбу или цилиндр вместимостью 1 л, доводят до метки дистиллированной водой и перемешивают; определяют рН при помощи индикаторной бумаги); иногда применяют другие буферные смеси: 2) бромфено-ловый синий (0,5 г бромфенолового синего, 10 г кристаллического сульфата цинка, 20 мл ледяной уксусной кислоты растворяют в 500 мл дистиллированной воды); сульфат цинка и уксусную кислоту добавляют для фиксации белков;

3) 2% раствор уксусной кислоты для отмывания избытка красителя (980 мл дистиллированной или водопроводной воды смешивают с 20 мл крепкой уксусной кислоты);

4) 0,01 н. раствор едкого натра для элюирования (извлечения) краски из электрофореграмм (10 мл 0,1 н. раствора щелочи помещают в колбу вместимостью 100 мл и доводят до метки дистиллированной водой; реактив готовят перед началом исследования).

Устройство прибора для электрофореза. Разделение белковых фракций проводят на различного типа аппаратах для электрофореза, и.пользуя в качестве носителя специальную фильтровал; • булгу. В зависи

мости от типа камеры для электрофореза бумагу нареза* -ют полосками требуемого размера (2,5x26 или 3,5x40 см).

К настоящему времени предложено много самых различных аппаратов для электрофореза на бумаге. Основным требованием к используемому прибору является наличие источника постоянного тока, который должен подавать на клеммы выпрямленный ток силой 50—100 мА при напряжении 180— 400 В. Аппарат для электрофореза на бумаге (рис. 63) представляет собой камеру (1) из толстого стекла, закрывающуюся крышкой (2). На дне камеры устанавливаются свободно вынимающиеся кюветы (5), в которые опущены концы электродов (3). Посередине камеры установлена свободно вынимающаяся рамка, на которой укрепляют бумажные ленты (4). В камере должна создаваться и поддерживаться определенная влажность воздуха для предохранения бумаги от высыхания.

Ход определения. Устанавливают камеру строго горизонтально по уровню с помощью установочных винтов (7). В оба отделения кювет наливают буферный раствор до одинакового уровня, соединяют эти отделения полоской хроматографической бумаги — фитилем (6). Фитиль служит электрическим мостиком между отделениями кювет и препятствует изменению рН на лентах. Подготавливают полоски хроматографической бумаги требуемого размера, отмечают место нанесения сыворотки («старт») мягким карандашом на расстоянии 4—8 см от катода (минуса). Полоски смачивают буферным раствором, слегка отжимают между листами обычной фильтровальной бумаги и кладут на рамку между кюветами. Лента должна

230

быть равномерно натянута, .концы ее погружают в буферный раствор внутренних отделений кювет. На ленту, в месте отмеченного старта, помещают 0,005—0,01 мл неге-молизированной сыворотки. Производят эту операцию краем шлифованного стекла (покровного, предметного), на который микропипеткой наносят сыворотку, равномерно распределяя ее по краю стекла. Ширина стекла должна быть на 6—8 мм уже хроматографической ленты, тогда края ленты будут свободны от сыворотки. Стекло переворачивают сывороткой вниз, прикладывают под острым углом к поверхности бумаги и придерживают в этом положении несколько секунд, пока сыворотка не перейдет на ленту.

После нанесения сыворотки плотно закрывают камеру крышкой и включают прибор. Через бумажные ленты начинает проходить постоянный электрический ток и осуществляется собственно электрофорез. Электрофоре-тическое разделение белков сыворотки крови проводят при комнатной температуре и напряжении тока от 3 до 8 В на 1 см длины ленты. Время электрофореза определяется опытным путем и обычно составляет от 6 до 20 ч.

По окончании электрофореза ток выключают, ленты извлекают из камеры, концы их обрезают или отжимают фильтровальной бумагой. Ленты сушат 15—20 мин в сушильном шкафу при 95—105° С: происходит коагуляция белка, и он закрепляется на ленте. После этого ленту окрашивают, погружая на 20—30 мин в эмалированные кюветы с раствором красителя. Фракции белков адсорбируют краску пропорционально своей концентрации. Ленты извлекают, избыток красителя удаляют, промывая их в 3—4 порциях 2% уксусной кислоты. Сушат при комнатной температуре, желательно в затемненном месте.

Электрофореграмма сыворотки крови представлена на рис. 64 (см-, на цвет. вкл.).

Количественные соотношения отдельных белковых фракций можно определить с помощью прибора денситометра. В приборе производится автоматическая запись концентраций окрашенных зон, где располагаются отдельные фракции. Определение осуществляется путем пропускания светового пучка через электрофореграмму. Количество света, прошедшее через участки электрофореграм-мы, обратно пропорционально количеству красителя, адсорбированного отдельными фракциями.

Более просто определение белковых фракций производится методом элюирования (извлечения) краски из бумаги и колориметрического измерения ее количества. Для этог

страница 85
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108

Скачать книгу "Клинические лабораторные исследования" (2.84Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
сковородки немецкой фирмы
день учителя подарок
бухгальерские курсы
курсы компьютерные курская

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)