химический каталог




Клинические лабораторные исследования

Автор А.Я.Любина Л.П.Ильичева Т.В.Катасонова С.А.Петросова

овы механизмы обезвреживания аммиака в организме?

9. Что такое остаточный азот и каковы его компоненты?

10. Каковы причины ретенционной азотемии?

11. Каковы причины продукционной азотемии?

12. Какова диагностическая ценность определения отдельных компонентов остаточного азота?

13. Какова роль печени в белковом обмене?

14. Какие функциональные пробы применяют для выявления заболеваний печени?

15. Из каких компонентов состоит остаточный азот и как они изменяются при заболеваниях печени?

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

§ 109. Определение общего белка сыворотки крови по биуретовой реакции

Белки в щелочной среде реагируют с сульфатом меди^ с образованием комплексных соединений, окрашенных в фиолетовый цвет. По интенсивности окрашивания, которое пропорционально количеству белка, определяют содержание его в сыворотке крови.

Реактивы: 1) 0,9% раствор хлорида натрия (0,9 г соли на 100 мл дистиллированной воды);

2) 0,2 н. раствор едкого натра, свободного от углекислоты (20 мл 1 н. раствора щелочи доводят до объема 100 мл прокипяченной дистиллированной водой);

3) основной биуретовый реактив (4,5 г сегнетовой соли— виннокислого калия-натрия КЫаСЛ^Об, растворяют в 40 мл 0,2 н. раствора едкого натра; после растворения прибавляют 1,5 г гидросульфата меди CuS04-5H20 и 0,5 г йодида калия, доливают до метки 100 мл 0,2 н. раствором едкого натра; хранят в темном месте или в посуде из темного стекла не более месяца);

4) 0,5% раствор йодида калия (0,5 г соли растворяют в 100 мл 0,2 н. раствора едкого натра; хранят в посуде из темного стекла не более 2 нед);

5) рабочий раствор биуретового реактива (20 мл основного биуретового реактива смешивают с 80 мл раствора йодида калия в растворе едкого натра); хранят в темном месте не более 2 нед;

6) стандартный 10% раствор альбумина в 0,9% растворе хлорида натрия (1 г альбумина из человеческой или бычьей сыворотки растворяют в 6—7 мл 0,9% раствора хлорида натрия и доводят изотоническим раствором хлорида натрия до объема 10 мл; 1 мл стандартного раствора содержит 0,1 г белка).

Ход определения. К 5мл рабочего раствора биуретового реактива (5) добавляют, избегая образования пены, 0,1 мл сыворотки крови. Через 30 мин (не позднее 1 ч) производят измерения на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 5 мм при зеленом светофильтре (540—560 нм) против контроля (5 мл рабочего раствора биуретового реактива). Расчет ведут по калибровочному графику, на основе которого для удобства составляют таблицу пересчета или с помощью экспериментально полученного коэффициента.

Построение калибровочного графика. Готовят рабочие стандартные растворы. Для этого из стандартного 100 г/л, т. е. 10 г на 100 мл, раствора белка готовят серию разведений, как указано в табл. 10.

226

227

Таблица 10. Схема приготовления стандартных растворов

Стандартный раствор 0,9% раствор, Концентрация белка - белка, мл NaCl, мл

г/100 МЛ г/л

0,4 ~0,6 4 40

0,6 0,4 6 60

0,8 0,2 8 80 '-.

1,0 — 10 100

Из каждого разведения берут по 0,1 мл раствора вносят в чистые пробирки, куда добавляют по 5 мЛ рабочего биуретового реактива (5). Через 30—60 ми измеряют экстинкцию на ФЭКе против контроля, начин; с наименьшей концентрации.

Обычно для калибровки не ограничиваются одной серией определений и разведений. Для каждой концентрации делают не менее 2—3 определений. Данные наносят на миллиметровую бумагу. На оси абсцисс (горизонтальной) равномерно наносят значения концентраций, на оси ординат (вертикальной) — средние значения оптической плотности (экстинкций), соответствующие взятым концентрациям белка/Через полученные точки, (а при необходимости— между ними) проводят прямую линию. Масштаб выбирают так, чтобы линия располагалась под углом, близким к 45°.

Иногда характер графика для больших концентраций несколько отклоняется от прямой линии, однако если

228

результаты стабильно повторяются, то такой график вполне пригоден для работы.

Калибровочную кривую нужно время от времени проверять. При этом достаточно проверить 2—3 точки. Если они укладываются на прежнем графике, то он не переделывается. Для облегчения подсчетов составляют таблицу. Пример калибровочного графика приведен на рис. 62.

Норма общего белка: 65—85 г/л.

§ 110. Определение белковых фракций сыворотки крови методом электрофореза на бумаге

Белки сыворотки, обладающие электрическим зарядом различной величины, под воздействием постоянного тока движутся по смоченной буферным раствором бумаге к положительному полюсу. Скорость движения белковых молекул зависит от величины заряда и молекулярной массы частиц, что и позволяет разделить белки сыворотки крови на 5 основных фракций: альбумины и глобулины — eti, а 2, Р, 7- При дальнейшей обработке фракции белков выявляются при помощи красителей, которые связываются с ними пропорционально их содержанию.

Реактивы: 1) барбитал-натриевый буферный раствор, рН 8,6 (10,32 г барбитал-натрия растворяют в 30

страница 84
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108

Скачать книгу "Клинические лабораторные исследования" (2.84Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
костюмы утеплённые в томске
сход развал ярославское шоссе
столы журнальные китай купить
такси 10 мест

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(03.12.2016)