химический каталог




Химия природных соединений (углеводы, нуклеотиды, стероиды, белки)

Автор Н.К.Кочетков, И.В.Торгов, М.М.Ботвиник

к и в описанных выше случаях, на один аминокислотный остаток

меньше, чем исходный пептид.

ОН'

RCONHCSR-f NH2CH(R)CO—NHCH(R)CO . . .

S I

11 нRCONHCNHCH(R)CO—NHCH(R)CO ... » NH—CHR+NH2CH(R)CO . . .

I i

II CS CO

NH

Большое значение приобрели в последнее время ферментативные методы, которые позволяют не только устанавливать N- и С-концевые аминокислотные остатки, но и чередование их в пептиде и белке.

Для определения N-концевой аминокислоты пользуются лейцинами-нопептидазой, выделяемой из слизистой оболочки кишечника. Лейцин-аминопептидаза расщепляет экзопептидную связь, образованную аминокислотным остатком, содержащим свободную аминогруппу. При этом происходит ступенчатая деградация пептида.

аминопептидаза

NHaCH(R)CONHCH(R)CONHCH(R)CO . . . »

NFjaCHJRJCOOH+NHaCH^CONHCHfRJCO ... и далее

?И 9

Методы определения С-концевых аминокислот пептидов и белков менее разработаны. Следует остановиться на трех способах.

1. Селективное восстановление карбоксильной группы. При обработке пептида или его эфира мягкими восстановителями LiAlH4, 1лВН4,

AIH3 карбоксильная группа восстанавливается до спиртовой. Восстановленный пептид подвергают гидролизу и в гидролизате наряду с

аминокислотами обнаруживают аминоспирт, соответствующий концевой

С-аминокислоте. Его можно извлечь в органический растворитель и

определить хроматографически или превратить в пикрат или динитрофенильное производное;

... NHCH(R)CO-NHCH(R)C0-NHCH(R)C00H-j-LiAlH4-^

.. . NHCH(R)CO-NHCH(R)CO-NHCH(R)CHBOH —-» . . . NHKCH(R)COOH-f-NH2CH(R)COOH+NHaCH(R)CH2OH^

Детальное изучение реакции показало, что L1AIH4 может три длительном воздействии и более жестких условиях восстанавливать и пептидную связь.

2. Гидразинолиз — метод Акабори.

Амиды кислот реагируют с гидразином, образуя гидразиды кислот и аммиак.

RCHjj—CONH2+NH2—NH2 —? RGH2—GONHNHa-bNH3

Пептиды реагируют также пептидной группой с образованием гидра-зидов аминокислот. Не вступает в реакцию только С-концевая аминокислота, поскольку карбоксильная группа не реагирует с гидразином.

NHa-CH—CONH-CH—CONH-CH—CONH—СН—COOH+NHa—NHa —?

1111

R R' R" Rw

NHa—CH—CONH#-bNH2^^-CH—CONHNHa+NH2—CH—CONHNH2-fNHa-CH—COOH

R R' R" R,ff

Для отделения аминокислоты от гидразидов аминокислот смесь обрабатывают альдегидом, который образует с гидразидами труднорастворимые гидразоны. С-концевую аминокислоту определяют хроматографически. Этим методом не всегда удается получить хорошие результаты. Реакция проводится в сравнительно жестких условиях, при которых частично распадаются цистин, аспарагин, глутамин и аргинин. Все же этот метод является одним из широко применяемых.

3. Ферментативное расщепление пептида с С-конца.

Для этого пользуются карбокснпептидазой, выделяемой из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Карбоксипептидаза расщепляет экзо-пептидную связь, образованную аминокислотным остатком со свободной карбоксильной группой.

карбоксипептидаза

. . . NHCH(R)CONHCH(R)CO—NHCH(R)CO-NHCH(R)COOH ?

. . . NHCH(R)CO—NHCH(R)CONHCH(R)COOH+NHaCH(R)COOH

Из всех методов определения С-концевых аминокислот этот метод самый специфичный. Пользуясь карбокснпептидазой также, как при действии аминопептидазой, можно определять не только С-концевую аминокислоту, но и последовательно отщеплять аминокислотные остатки с С-конца пептида. Реакция обрывается, когда в пептидной цепи встречается пролин, так как карбоксипептидаза не гидролизует связь СО—N.

Таким образом ферментативные методы дают возможность не только определять N и С-концевые аминокислоты, но и устанавливать порядок чередования аминокислотных остатков на N- и С-концах пептидов.

Следующей задачей при определении строения пептидов является установление характера связи и последовательности аминокислотных остатков в молекуле пептида или белка. Эта задача, трудно выполнимая в настоящее время для белков с большим молекулярным весом, облегчается тем, что в природе встречается значительное число относительно низкомолекулярных соединений, представляющих собою пептиды. Виланд предлагает различать три группы природных пептидов: олигопептиды, состоящие из 2—10 аминокислот, полипептиды, состоящие из 10—100 аминокислот, и макропептиды, к которым относятся собственно белки. Изучение природных пептидов представляет собой важный этап в подходе к изучению строения белка. Исследование обычно начинают с определения числа цепей, входящих в состав объекта изучения. Для этого пользуются одним из ранее приведенных методов, например динитрофенилированием, действием азотистой кислоты или аминопептидазы для определения N-концевой аминокислоты и восстановлением, гидразинолизом или действием карбоксипептидазы для определения С-концевого остатка (см. стр. 510 и далее).

Самый совершенный метод установления последовательности аминокислот в пептиде заключался бы в постепенном отщеплении их от полипептидной цепи, подобно тому, как синтез пептида проводят последовательным нанизыванием аминокислотных ост

страница 181
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 161 162 163 164 165 166 167 168 169 170 171 172 173 174 175 176 177 178 179 180 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 193 194 195 196 197 198 199 200 201

Скачать книгу "Химия природных соединений (углеводы, нуклеотиды, стероиды, белки)" (5.87Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Газовые котлы Buderus Logamax plus GB162 65
купить цветные линзы карнавальные
магазин интернет компьютерных столов
вентилятор vkk160

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(08.12.2016)