химический каталог




Нейрохимия. Основы и принципы

Автор Ф.Хухо

гормонального рецептора (см. с. 325).

Генная инженерия совершила революцию в нейрохимии

Эта глава книги «Нейрохимия» (а значит, и вся книга) была бы неполной, если бы я не описал кратко огромные возможности и некоторые первые успехи метода клонирования. Место,, .уделяемое генной инженерии в книге, ни в коем случае не следует соотносить с его значением для нейрохимии. Напротив, роль, которую молекулярная генетика, методы рекомбинантных ДНК и клонирования (молекулярного и клеточного) будут, по-видимому, играть в будущем, представляется мне очень важной. Для детального рассмотрения генной инженерии необходим был бы целый дополнительный том, поэтому здесь это сделано лишь в общих чертах. (Пока такого тома еще нет, я должен отослать читателя к публикациям по молекулярной биологии.)

Проникновение молекулярной генетики в нейрохимию сравнимо с применением электроники и электронной микроскопии в естествознании. И это не преувеличение. Позвольте обосно24—1481

370

Глава 12

Экспериментальные модельные системы

371

вать такое замечание. Идентификация, выделение и биохимическая характеристика нейропептидов из мозга млекопитающих в последние годы развивались особенно активно. Однако один гипоталамус крысы содержит, например, только фемтомолярные количества гормонов — регуляторов высвобождения фактора роста (соматолиберин; GRF) или фактора высвобождения кор-тикотропина (кортиколиберин; CRF). Последний был недавно выделен в чистом виде из гипоталамуса 60 ООО крыс, и его первичная аминокислотная последовательность была определена самыми современными методами микросеквенирования. Анализ многих тысяч известных и еще неизвестных пептидов и белков мозга, таким образом, был бы почти безнадежной задачей. Но с помощью методов генной инженерии она становится реально выполнимой.

Короче говоря, необходимо только несколько микрограммов мРНК в виде смеси, присутствующей в ткани, продуцирующей искомый белок. Из этой смеси разных молекул мРНК можно выделить или частично очистить только одну, несущую информацию о данном белке. Соответствующая копия ДНК (кДНК) различных мессенджеров продуцируется с помощью обратной транскриптазы; молекулы кДНК включаются в вектор (плазми-ду) посредством целого ряда ферментативных стадий, которые сложны, но уже хорошо изучены и могут быть выполнены^ в лаборатории, специализирующейся в области молекулярной биологии. Плазмида — фактически популяция плазмид, причем каждая содержит одну особую встроенную мРНК, вводится в бактерии. Следует заметить, что в каждую бактерию встраиваются различные плазмиды (т. е. различные кДНК, комплементарные различным мРНК). Теперь уже действительно имеет место «клонирование»: потомство одной отдельной бактерии— клон, поэтому следует отобрать клон, продуцирующий нужный белок. Это наиболее трудоемкая и сложная часть работы. Трудоемкая, поскольку необходимо проверить десятки и сотни-клонов, сложная, так как, если продукт трансляции кДНК в плазмиде не является ферментом или гормоном, активность которых легко тестировать, следует применять более сложную методику. Еще одной сложностью при идентификации искомого продукта трансляции является появление неактивного продукта трансляции в отсутствие посттрансляционного процессинга, который не может произвести бактерия.

Приходится удовлетвориться продуктом транскрипции — кДНК. Его можно продуцировать в больших количествах при росте клона и секвенировать по методу Максама — Гилберта или по методу Сенгера. Из нуклеотидной последовательности можно вывести аминокислотную последовательность. Конечно, первичная структура искомого белка, полученная таким путем, может быть предшественником и представлять собой просто аминокислотную последовательность без возможных углеводных, ацетильных, метальных или фосфатных групп, необходимых для проявления активности. Если клонирован непосредственно ген, кодирующий нужный белок (не через мРНК — кДНК), он может даже содержать интроны, которых нет в конечном продукте гена.

Мы уже видели в предыдущих главах этой книги некоторые применения методов рекомбинантной ДНК в нейрохимии. Одним из наиболее впечатляющих успехов является определение природы опиоидных пептидов, идентификация трех предшественников энкефалинов, динорфина и ряда пептидных гормонов (гл. 8). Другим примером является клонирование четырех различных полипептидных цепей никотинового ацетилхолинового рецептора (гл. 9). Их последовательности, выведенные из соответствующих кДНК, сейчас известны. Более того, активный рецептор был экспрессирован из кДНК в ооцитах лягушки Xenopus — еще одной модельной системы, очень важной для нейрохимика.

Клонирование гибридом для получения моноклональных антител

Линия гибридомных клеток не истинно нейрональная модельная система, однако она должна быть упомянута здесь, поскольку представляет собой полезный инструмент исследования в нейрохимии. Каждый В-лимфоцит обычно секретирует только один тип антител. Смесь большого числа моноспецифических антител образует нормальную гетерогенную антисыворотку. Д

страница 128
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134

Скачать книгу "Нейрохимия. Основы и принципы" (4.85Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
мебюельная ручка золото
купить твердотоплевный котел длительного горения в москве
готовые комплекты оборудования с колонками в аренду
переворачивающаяся рамка для номера купить

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(02.12.2016)