сырья полярными растворителями: метил или этиловым спиртом н водой. Сырье предварительно обрабатыва... петролейным эфиром или четыреххлористым углеродом для разрушения комплексов сапонинов со стеринами.

Методы выделения суммы сапонинов из экстракта зависят от их строения. Гликозиды с небольшим числом моносахаридных остатков (3—4) обычно плохо растворимы в воде и выпадают в осадок при разбавлении спиртовых растворов водой. Полярные сапонины плохо растворимы в метиловом и этиловом спиртах и выпадают в осадок при охлаждении или продолжительном стоянии спиртовых растворов, либо при добавлении спирта к водным и водно-спиртовым растворам. Кислые сапонины растворимы в водных растворах щелочей и выпадают в осадок при подкисдеяии. Из спиртовых растворов тритерпеновые сапонины осаждают этиловым эфиром, ацетоном, этилацетатом, а некоторые — бутиловым и изо-амиловым спиртами. Из водных растворов сопутствующие мало-нолярньге примеси извлекают этиловым эфиром, хлороформом, четыреххлористым углеродом, а тритерпеновые гликозиды —бутиловым или изоамиловым спиртом.

Полученные сапониновые фракции очищают повторным переосаждением, что, однако, не приводит к полной очистке от полярных сопутствующих веществ: неорганических примесей, моно-и олигосахаридов, гликозидов других классов, органических кислот и др. Ряд методов основан на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидроксидом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, танинами, белками. Соли затем разлагают угольной или серной кислотами; холестериновые комплексы — извлечением холестерина бензолом, толуолом, этиловым эфиром или пиридином; таниновые — кипячением с водной суспензией оксида цинка; белковые — извлечением гликозидов подходящими органическими растворителями.

Эта группа методов дает более чистую сумму сапонинов, но не является общей методикой и не гарантирует количественного выделения и отсутствия значительного содержания балластных веществ в отдельных случаях.

Сапонины, образующие коллоидные растворы, очищают от примесей, дающих истинные растворы (моносахариды, минеральные вещества), с помощью диализа и электролиза. Хорошие результаты очистки сапониновых фракций от растительных пигментов и восстанавливающих Сахаров получены при гельфильтрацни на сефа* дексах У-25, У-50, А-25.

Значительное распространение нашли хроматографические методы очистки суммы сапонинов. Гликозиды, содержащие свободные карбоксильные группы, могут быть отделены от сопутствующих веществ, в том числе и от минеральных примесей, с помощью ионообменной хроматографии. Хроматографическую очистку суммы сапонинов проводят на оксиде алюминия, силикагеле, активированном угле.

44

45

В отличие от других классов природных соединений (аминокислот, углеводов ит. п.) для сапонинов нет универсальных систем элюирования. Для нейтральных сапонинов наиболее подходящие системы: «-бутиловый спирт—этиловый спирт—вода; «-бутиловый спирт — уксусная кислота — вода (в различных соотношениях, верхний слой); хлороформ — метиловый спирт — вода (65 : 35 : 10).

Для обработки хроматограмм можно использовать те же реактивы, что и при проведении цветных реакций на сапонины. Так, для обнаружения ? стероидных сапонинов хроматограмму сначала опрыскивают i %-ным спиртовым раствором SbCl3, а затем после высушивания HsS04 с уксусным ангидридом образуются желтые пятна.

Для обнаружения тритерпеновых сапонинов применяют раствор 20%-ной H2S04. После обработки хроматограммы этим раствором с последующим нагреванием в сушильном шкафу при t = 115— 120 °С в течение 15 мин появляются фиолетовые пятна. Используют также насыщенный хлороформный раствор SbCl3 со следами SbClb, который дает с тритерпеновыми сапонинами розово-фиолетовое окрашивание.

При выяснении структуры сапонинов, как и других гликозидов, определяется строение агликона и углеводной части, а также выясняется место и способ присоединения углеводной составляющей к агликону.

При установлении строения санонинов помимо традиционных методов (элементарный анализ, определение молекулярной массы) широко используются методы УФ спектроскопии, И« спектроскопии, ПМР спектроскопии,

ИК спектроскопия при исследовании тритерпенов применяется для обнаружения и характеристики двойных связей, гидроксиль-ных групп, О-ацильпых группировок, карбонильных, карбоксильных, геминальных и ангулярных метальных групп. По характерным полосам поглощения СН3-групл в области 1245—1392 см-1 отличают тетрациклические тритерпены от пентациклических групп а- и р-амирина, а также последние друг от друга. По ИК спектрам продуктов окисления оксидом рутения (IV) предложен метод, доказательства положения изолированной двойной связи в тритерпенах.

Строгое отнесение сапонинов к стероидам может быть сделано на основании ИК спектров и их генинов: наличие полос поглощения при 852 (866), 900 (900), 922 (922), 987 (982) см"1 (спирокеталь-ная группировка нормального и изо-рядов) позволяет однозначно отнести сапонины к стероидному ряду.

В п