ное кольцо. Для установления наличия пятичленного лактонного кольца проводятся реакции: Легаля (с гштропруссидом натрия); Раймонда (с л(-динитробензолом); Кедде (с 3,5-дишгтробензойной кислотой); Балье (с пикриновой кислотой). Реакции проводятся в щелочной среде. На шестичлеиное лактонное кольцо не найдены достаточно специфические реактивы. Для обнаружения буфадиенолидов на хроматограммах используют 20%-ный раствор треххлористой сурьмы в хлороформе.

Методики качественных реакций. Приготовление извлечения: 5 г измельченных листьев наперстянки заливают 50 мл 80%-ного этилового спирта, настаивают 24 ч. Спирт отгоняют под вакуумом, водный остаток промывают в делительной воронке четыреххлористым углеродом 6 раз по 10 мл. Сердечные гликозиды извлекают смесью хлороформ — изопропиловый спирт (3:1) 4 раза по 10 мл. К полученному извлечению добавляют 2 г безводного Na2S04, дают постоять 3—5 мин, а затем отфильтровывают через бумажный фильтр.

Качественные реакции. Реакция Келлер — Килиани. Готовят два раствора: 1 — ледяная, уксусная кислота, содержащая следы Fea(S04)3; 2 — концентрированная серная кислота также со следами Fe2(SOt)a. Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в растворе I и осторожно по стенке пробирки вливают раствор 2. При наличии дезоксисахара верхний слой через некоторое время окрасится в васильково-синий цвет.

Реакции Либермана — Бурхарда. Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в ледяной уксусной кислоте и добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (50:1). Через некоторое время развивается окраска от розовой к зеленой и синей.

Реакция Розенгейма. Сухой остаток очищенного извлечения растворяют в хлороформе и смешивают с 90%-ным водным раствором трихлоруксусной кислоты. Появляются сменяющие др^г друга окраски от розовой до лиловой и интенсивно синей.

Реакция Легаля. Готовят два раствора: 1 — 5%-ный раствор нитропруссида натрия; 2 — 10%-ный раствор едкого натра. Сухой остаток очищенного извлечения.растворяют в 0,5 мл 100%-пого метилового спирта. Полученный раствор вливают в пробирку и добавляют 1—2 капли раствора I. Затем, осторожно (не взбалтывая!) по стенке добавляют 1—2 капли раствора 2. На границе 2 растворов появляется красное окрашивание в виде кольца.

§ 5. Количественное определение

33

До настоящего времени не представлялось возможным устаю-нить содержание того или иного сердечного гликозида в присутст-i.isii других, так как реактивы, предложенные для количественного определения гликозидов, являются общими. Поэтому весьма пер-

Q л/р Гриикекнч а др.

слективным считается сочетание хроматографии с дальнейшим использованием фотометрии, потенгшометрии, полярографии, флуори-метрии и др.

Хорошие результаты получают при хроматографии ка бумаге, пропитанной формамидом. В этом случае применение систем бензол — хлороформ (9:1); (7:5); (3:7) пли смесей толуол — к-бутанол (9:1); (4:1); (2:1); (1:1), смесей состава этилаиетат— бензол — вода (84:16:50), хлороформ — бензол — н-бутанол (78:12:5) или просто хлороформа в качестве подвижной фазы позволяет достичь четкого разделения отдельных групп гликозидов. В последние годы также широко используется тонкослойная хроматография. В качестве сорбента могут применяться тальк, силикагель, кизельгур и др. Системы используются такие же, как для бумажной хроматографии.

Для обнаружения гликозидов на хроматограммах применяют реактивы, вызывающие флуоресценцию или окрашивание. Наиболее широко применяют смесь 25%-ной трихлоруксусной кислоты и 3%-ного раствора хлорамина в этиловом спирте (15:1). В УФ свете производные дигитоксигенина дают четкую золотисто-желтую флуоресценцию; гитоксигекина — голубую; дигоксигенина — стальную.

Для количественного определения наиболее простыми и доступными считаются фотометрические методы — фотоколорнмегрии и спектрофотометрия сердечных гликозидов и их генинов в видимой области спектра. Эти методы основаны на цветных реакциях сердечных гликозидов с различными нитросоединениями (пикрат натрия, 3,5-динигробензол и др.) или ксантгидролом. Для приготовления эталонного раствора можно использовать кристаллические гликозиды, но ввиду трудности их получения были рекомендованы также растворы дихромата калия и сульфита натрия.

Флуориметрическне методы основаны на способности сердечных гликозидов фпуоресцировать под действием сильных кислот (концентрированные серная, фосфорная кислоты) и окислителей (перхлорат Железа, хлорное железо) после кратковременного облучения УФ светом. Эти методы применимы только к сердечным глико-зидам, которые в результате дегидрирования образуют моно-и диангидросоединения.

В основе полярографических методов определения сердечных гликозидов лежит их способность восстанавливаться на ртутно-капельном электроде при потенциалах 1,9—2,0 В, образуя диффузные токц, волны которых пропорциональны концентрации сердечных гликозидов.

В последние годы для количественного определения сердечных гликозидов стал применяться метод газожидкостной хроматографии (ГЖХ). П