химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

обработки выражают первоначально в координатах и

от т, затем в виде кривой Михаэлиса — Ментен в координатах v от [S]0 или от других внешних условий проведения эксперимента. Далее проводят линеаризацию в

координатах Лайнуивера — Берка (о-1-—[S]^1)

e_1=^x+KM/(Kmax[S]0) (3)

и в координатах Иди (v—v/[S]o)

v=Vm!ix — K№/[S]tt. (4)

Константы уравнения Михаэлиса (Утах, Км) вычисляют с помощью уравнений (3) и (4).

График зависимости в координатах Лайнуивера — ^ерка имеет вид прямой линии, пересекающей оси абсцисс и ординат в точках — ^-м1 aVmL соответственно (Рис. 22), тангенс угла наклона ее равен /См/VmaxГрафик зависимости в координатах Иди имеет вид прямой линии, пересекающей оси абсцисс и ординат в т°Чках Утах и Vmax/Км соответственно (рис. 23), тангенс угла наклона ее равен — Л"ми ь-^Ри необходимости получить особенно точные значения Vm!Ll обработка уравнений (3) и (4) может быть проведена мето-м наименьших квадратов (см. приложение 1, § i, 2).

Зак. 791 161

Рис. 22. Определение кинетических параметров ферментативной реакции методом Лай-нунвера — Берка

На основании кривой Михаэлиса — Ментен можно cj дить о правильности выбора диапазона концентрации субстрата и об отсутствии субстратного ингибированш

При линеаризации кривой Михаэлиса — Ментен п двум вышеприведенным методам кинетические парамет ры реакции — Км и Утлх должны быть одинаковым! кроме того, величина Vmax должна совпадать с величи ной активности фермента в рабочем растворе.

Исследования при различных рН и температурах присутствии активаторов процесса (ионов Mg2+) пр их концентрациях от 0 до 0,1 М и при ингибированп реакции конкретным ингибитором / (щелочной фосфа тазой Na3P04) при концентрации от 0,5-Ю-4 до 2-Ю~3-А помогают изучить влияние этих факторов на кинетнчее кие параметры.

При наличии ингибитора в системе уравнение Михаз лиса — Ментен принимает вид v= Vm^[S]0l{Ku(^

Это означает, что при варьировании концентрации пнгп битора наблюдаемая Ушах не меняется, а наблюдаема Км растет пропорционально росту концентрации ингибп тора [/].

В координатах Лайнуивера — Берка это выражаете в возникновении прямых, каждая из которых отвечае

162

фиксированному значению [/], пересекающихся на оси ординат (рис. 24).

Величина Kj, характеризующая сродство, ингибитора к ферменту, может быть получена построением зависимости Kyi—U] (тангенс угла наклона ее равен KJ1 ) либо аналитически для каждой комбинации значений [S]0 и [/] по формуле Kj=[J]{(V(,—Vj) — -1} KmI{Km+[S]0}, где vj—скорость реакции при

данных значениях [S]0 и [/]; v0 — скорость реакции при том же значении [S]0 в отсутствии ингибитора (j/J = 0).

При исследовании ингибирования ферментативной реакции можно рассчитать величины Км, Vmax и Kj.

Все экспериментальные данные, графический и расчетный материалы оформляются в виде таблиц, графиков п обобщающих выводов в целом по всей работе.

ГЛАВА III

НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ (НИРС)

Научно-исследовательская работа студентов является важным этапом обучения в вузе и в настоящее время зключена- официально в учебный план. Она имеет своей Целью систематизацию, закрепление и расширение теоретических знаний студентов, углубленное изучение конкретных вопросов, связанных с микробиологическими производствами, в соответствии с темой работы, овладение навыками самостоятельного проведения анализов, "х систематики, .принятия верных решений и построения Четких, конкретных выводов.

По завершении обязательных для каждого студента •лабораторных работ он получает задание на выполнение

6* 163

ПРИЛОЖЕНИЕ U

НЕКОТОРЫЕ СПРАВОЧНЫЕ ТАБЛИЦЫ

Таблица 1

Приготовление трис-буфера (mpuc-оксиметиламннометана—НС1) с рН 7,2—9,1

Для получения 0,05 М буфера 0,2 М раствор плис-буфера (24,23 г в 1 дм3 воды) смешивают с 0,1 н. раствором НС1 в мерной колбе на 100 см3 (доводят до метки водой) в следующих соотношениях;

Таблица 3

Приготовление фосфатного буфера с рН 4,94—9,18. Для приготовления смеси растворяют 11,876 г Na2HP04 ? 12Н20 в 1 дм3 воды и 9,078 г КН2РО, в 1 дм3 воды. Для получения приведенных значений рН растворы смешивают в следующих соотношениях:

рН Na.HPO,, см' КНгРО,, см» j рн NaaHP04, CMS КН,РО,, см"

4,94 1,0 99,0 6,98 60,0 40,0

5,29 2,5 97,5 7,17 70,0 30,0

5,59 5,0 99,5 7,38 80,0 20,0

5,91 10,0 90,0 7,73 90,0 10,0

6,24 20,0 80,0 8,04 95,0 5,0

6,47 30,0 70,0 . 8,34 97,5 2,5

6,04 40,0 60,0 8,67 99,0 1,0

6,81 50,0 50,0 9,18 100,0 0,00

Приготовление ацетатной буферной смеси. 1 н. растворы уксусной кислоты я ацетата натрия смешиваются в следующих соотношениях:

рн

Отношение 1,0 н. растворов, см3 6,62 5,9 5 ,6 5,3 5,0 4,7 *. 1 3.8 з.з .5,19

Ледяная уксус- 1 1 1 1 1 1 2 4 ос 16 32

ная кислота— 60,12 г в 1 дм3 воды

32 16 8

Ацетат натрия — 136,09 г в 1 дм3 воды

226

G-10

G-15

G-25 крупнозернистый G-25 среднезернистый G-25 мелкозернистый G-25 сверхмелкий G-50 крупнозернистый G-50 среднезернистый G-50 мелкозернистый G-50 сверхмелкий G-75

G-75 сверхмелкий G-

страница 58
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы компьютера 1 с 8
черные линзы с цветной радужкой
Кликните, закажите выгодней в KNS с промокодом "Галактика" - ssdsc2ba200g301 в Москве и с доставкой по городам России.
вентилятор канальный кд 500 цена

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)