химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ации этих веществ); п — порядок реакции, который может быть выражен целыми и дробными числами; k — коэффициент пропорциональности, или константа скорости реакции.

Для большинства простых реакций (кроме реакций нулевого порядка) кинетическая кривая, т. е. зависимость [С] от т, обычно имеет вид, показанный на рис.20. Текущая скорость v определяется путем построения кинетической кривой в крупном масштабе и отождествления ее малых участков с прямолинейными.

Для простых реакций с участием одного соединения или нескольких соединений с одинаковой начальной концентрацией уравнение приобретает вид о=—d[A]!fc=k[A] , откуда \gv = \gk+nlg\[A].

Строя зависимость lgv = flg[A], необходимо проверить исходное предположение о подчинении реакции уравнению (1), и если такое подчинение имеет место, то определить п и k.

Аналогичный расчет можно провести, исходя из значений начальных скоростей v0 при нескольких различных начальных концентрациях [А]0: v0 = — (d [A]/dx)0 = = k[A]n0, откуда lg vo = lgk + a \g{A]0.

Константы скорости реакции определяются рядом методов, но чаще всего для моно- и бимолекулярных необратимых реакций по следующим формулам:

для мономолекулярной реакции (1-го порядка), имеющей вид А-+Р, v = k[A]T, ft=(2,3/r)X

Xlg№№), или A=(2,3/T)lg([P]./{[P]=.-[P]T }), где [Р]т и [P]<» — концентрация продукта реакции в Данный момент времени и после завершения реакции соответственно, или k= (2,3/т) lg [ 1/(1— х)], где х — •«степень превращения», равная [Р]т /[Л]0;

Для бимолекулярной реакции (2-го по-Рядка), имеющей вид А + В-+Р, при равных на-Чальных концентрациях реагентов ([^]о = ЧВ]0), v = kiA]x[B]x=k[A}*, к=(1/[А]0т){([А]0-[А]х)}, али/е=(1/[Л]оТ) [х/(1-х)];

Для бимолекулярной реакции при

153

разных начальных концентрациях ре гентов ([Л]0>[В]о) v = k[A]x[B]r, ? = 2,3/{т([Л]0. ~[В]о)}lg{([А]о-[Р]г) [В]о/([B]o-[P]r) Wo}?

Кроме того, величину k определяют графически г тангенсу угла наклона зависимости 1ё(:М]о/[Л]т ) от или —^[Л]т от т для реакций 1-го порядка; Шх ( т для реакций 2-го порядка при [Л]|0=[В]0 и lg{fl/4]0-— [p]i)/([B]a—[P]x )} от г для реакций 2-го поряд ка при [Л]о>[5]оСуществуют и другие методы определения этих констант. Ферментативные реакции обычно включают две стадии: образование фермент-субстратного комплекса

ES (Е—фермент, 5 — субстрат) и его распад (E + S++

ES-lE + P), где Ks = [E][S]/[ES]— константа скорости образования фермент-субстратного комплекса; — константа скорости его распада. При [Sjn^ffjo уравнение скорости такой реакции имеет вид v = k^E\l)(,

X[S]T/(K, + [S]T).

Поскольку большинство ферментативных реакций ингибируется их продуктами, исследование проводят при начальных скоростях, когда расходом субстрата можно пренебречь ([S]T =[5]0), и уравнение приннмаг вид u = k2[E]o[S]o/(Ks + [S]o).

Обычно же ферментативная реакция протекает в и сколько стадий, т. е. сложнее, чем представлено выш Однако и в этом случае можно использовать послед* уравнение, записывая его в виде уравнения Мпхаэл са—Ментен: v = k^E^Sy (Кп + [Щ ? Это уравн ние имеет вид гиперболы (рис. 21).

Произведение ?кат на [Е]о имеет размерность скор сти и называется максимальной скоростью Ушах; п[ [5]0>/Хм v=Vmax. Величина Км (константа Мнхаэ.т; са) численно равна концентрации субстрата, при кот

РОЙ V=Vma.x/2.

Целью настоящей работы является получение пиитических характеристик фермента на примере щелочи' фосфатазы (Н. Ф. 3.1.3.1 — фосфогидролаза моноэфир' ортофосфорной кислоты) или на любом другом Фе менте.

154

-йГ.

Рис. 21. Типичная зависимость скорости ферментативной реакции or начальной концентрации субстрата (кривая Ми-хаэлиса — Ментен)

При проведении лабораторной работы осуществляются следующие операции: снимается кинетика превращения субстрата; снимаются характеристики процесса при изменяющейся концентрации субстрата; устанавливаются кинетические параметры в зависимости от концентрации фермента, рН, температуры и т. д.; вычисляются константы уравнения и строятся графические зависимости.

Снятие кинетики превращения субстрата. Кинетика превращения субстрата в продукт снимается при некоторой определенной концентрации фермента и при стандартных условиях реакции (температура, рН и т.д.). Определение ведется на начальной стадии процесса, когда убылью субстрата можно пренебречь.

Щелочная фосфатаза принадлежит к классу гидролитических ферментов, расщепляющих сложноэфириую связь ,в моноэфирах фосфорной кислоты, она также обладает трансферазной активностью. Весьма удобна для анализа щелочная фосфатаза, синтезируемая кишечной Точкой Е. coli.

Иссл,

(п

В качестве субстрата для проведения кинетических

(п тте^ований Удобно использовать га-нитрофеннлфосфат

п-н ® результате ферментативного гидролиза

пфф образуется га-нитрофенол, который ионизируется и слабощелочной среде, давая анион, обладающий интенсивным погло"Л02С6Н40--а

155 щением света при длине волны 400 нм (я-НФФ при этой длине волны не поглощает свет).

страница 55
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
смесь для стяжки теплого пола цена
хлебница деревянная
концерт жукова в москве 2017 купить билеты
вывеска на дом

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.06.2017)