химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ий чрезвычайно малыми адсорбционными свойствами. Поэтому разделение на полиакриламидном геле можно провести практически без потерь фракционируемого материала. Молекулярная масса фракционируемых веществ также очень существенна для разделения на полиакриламидном геле: чем она ниже, тем меньше индекс биогеля, который целесообразно использовать для Фракционирования.

Возможность применения гельфильтрационных мето-Дов разделения молекул с помощью препаратов сефадексов и биогелей ограничивается молекулярными мас-ьам" разделяемых веществ порядка 200 000—400 000. стественно, что такое ограничение исключает примене-'е этого чрезвычайно мягкого и эффективного метода Ля высокомолекулярных веществ типа нуклеиновых кис14Г

к

лот, некоторых белков и др. Лишь развитие молекуляр. но-ситовой хроматографии на основе агара или агаро. .зы, а также на коммерческих препаратах — сефарозе, са гаваке, АДО-Cel и некоторых других — дало возможность расширить применение этого метода.

Целью настоящей работы является фракционирование комплексного ферментного препарата с определением молекулярных масс фракций. Работа проводится ъ три занятия.

Первое занятие

На первом занятии студенты выбирают и монтируют колонки, готовят гель, заполняют колонки гелем, анализируют исходный ферментный препарат и готовят пробы для гельфильтрации.

Выбор колонки. Для получения хороших результатов при гельфильтрации необходимо правильно подобрать колонку. Независимо от типа колонки «холостое» пространство у ее дна должно быть минимальным. Если объем «холостого» пространства довольно большой, может происходить смешивание уже разделенных фракций.

Для того чтобы частицы геля не забивали поры издерживающей пластинки, расположенной на дне коло; ки, необходимо на пористую пластинку помещать кр; жок фильтровальной бумаги.

Длина колонки выбирается в зависимости от род-разделения. Для обессоливания могут использозатьс-короткие колонки (30—50 см), для фракционирования-более длинные (до 100 см). В колонках большого диг метра (25—30 мм) «пристеночный» эффект в меньше степени препятствует разделению, поэтому широкие и лонки дают лучшие результаты, чем узкие (10 мм) ; длинные. Однако для аналитической гельфильтрадп целесообразно использовать колонки диаметром 10 мм

Методика приготовления геля. Соответствующее кс личество суспендируют в 5—10-кратном объеме дистил лированной воды или буфера. После оседания основно массы частиц сефадекса мелкие плавающие в надое3-дочной жидкости частицы декантируют. Эту процедур повторяют несколько раз, пока надосадочная жидкое^ не станет совершенно прозрачной. После этого сефадек оставляют для набухания на различное время (табл.

J 48

В процессе набухания нужно избегать чрезмерных перемешиваний, так как это может привести к разрушению частиц сефадекса.

Заполнение колонки гелем. Перед заполнением колонки необходимо буфер и гель уравновесить при рабочей температуре, чтобы избежать в последующем образования пузырьков в колонке с гелем. Колонка должна быть установлена строго вертикально. Свободный объем под сеткой должен быть заполнен буфером. Осторожно перемешав, гель сефадекса, суспензию переливают по стеклянной палочке в колонку. Рекомендуется по возможности залить в колонку в один прием весь необходимый объем суспензии. После образования слоя геля толщиной 2—5 см открывают кран, выпускающий буферный раствор. Скорость протекания буферного раствора при заполнении колонки должна быть ниже той, которую устанавливают после нанесения препарата (20—30 емз/ч).

После заполнения колонки верхняя поверхность геля Должна быть горизонтальной и постоянно защищена слоем буфера. Колонка перед работой промывается 2— 3 объемами требуемого буфера или солевого раствора.

Анализ ферментного препарата и подготовка проб

Для гельфильтрации. Исходный ферментный препарат

знализируется на ферментативную активность и содержание белка. -1

При аналитической гельфильтрации объем наносимо-г° препарата должен быть минимальным (3—5 см3), но не менее 0,02% объема геля. При обеосоливании объем °бразца может составлять 25% от объема геля.

149

А

Большая вязкость проб вызывает нестабильность зо; и неправильный сход с колонки. Желательно в наноси мом объеме иметь 100—200 мг ферментного препарат,-в зависимости от вязкости раствора.

Второе занятие

На втором занятии студенты осуществляют следую щие операции:

вводят образец в колонку и фракционируют его; регенерируют колонку; анализируют полученные фракции; строят хроматограммы.

Введение в колонку анализируемого материала и ere фракционирование. При внесении материала в колонн необходимо выполнить два условия: осуществить равно мерное распределение раствора по поверхности геля i не нарушить при этом его упаковку. При внесении ма териала лучше всего пользоваться специальным фирмен ным приспособлением Pharmacia.

При отсутствии приспособления избыток жидкостт осторожно отсасывают и на поверхность защитного диска медленно, по каплям, из пипетки наносят материал Затем открывают выходной кра

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
металлочерепица rr11
Самое выгодное предложение от магазина компьютерной техники КНС - смартфоны в кредит - кредит онлайн не выходя из дома!
установка vs
боксы для хранения пвтомобильных колес

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(30.05.2017)