химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

енный тем или иным образом градиентный раствор при закрытом вентиле вносят в колонку через верхнее отверстие. Затем в электродную трубку (катод) заливают какое-либо сильное органическое основание (например, этаноламин), а на верхнюю часть градиентного раствора, примыкающую к аноду,— раствор сильнокислого электролита (например, фосфорной кислоты). Затем включают охлалсдение, создаваемое с помощью холодильной камеры «Колора», открывают вентиль и подключают прибор к источнику постоянного тока. Через 1—2 дня достигается равновесие, в результате которого создается описанный выше градиент рН.. Этот процесс сопровождается постепенным уменьшением силы тока, проходящего через колонку, так как по мере потерь амфолинами зарядов в изоэлектрических точках, их способность служить переносчиком заряда уменьшается. После того как сила тока достигнет стабильной величины, можно использовать напряжение около 700 В, В течение 1 дня после достижения равновесия смесь исследуемых веществ дает четкие полосы в области своих изоэлектричаских точек. Как правило, чем выше молекулярная масса, тем острее зона, в процессе же термодиффузии происходит расширение зон, занимаемых низкомолекулярными веществами.

Второе ,занятие

На втором занятии студенты осуществляют следующие операции:

отбирают фракции после проведения эксперимента;определяют рН, оптическую плотность и ферментативную активность во фракциях;

строят график распределения белка и ферментативной активности по фракциям в градиенте рН.

После окончания опыта содержимое колонки выпускается с помощью перистальтического насоса. Выход белка можно фиксировать с помощью автоматического Регистратора оптической плотности раствора «Увикорд» На самописце «Сервогор» или путем измерения оптиче-^к°й плотности каждой фракции на спектрофотометре светофильтре с максимумом светопоглощения при • = 280 нм.

145

1

В собранных фракциях измеряется рН и определяв ся ферментативная активность, затем рассчитывают, статистические оценки в виде доверительных ошиб (см. приложение I, § 1).

Полученные результаты заносятся в протокол наблк дения: JVb фракции

рн ~^

Dizo

Ферментативнаяактивность, ед./см3-

По полученным данным строится график распредс ления белка и ферментативной активности по фракция в градиенте рН. По оси ординат откладываются зна'н ния Z?28o по фракциям и ферментативная активность, по оси абсцисс—номера соответствующих фракций.

Лабораторная работа №10

Исследование ферментов методом гельфильтрации

Метод гельфильтрации предназначен для решен, экспериментальных проблем аналитического и препар тивиого характера.

Материал, используемый в данном методе в качес ве неподвижной фазы,— сефадекс — представляет соб> нерастворимый в воде высокогидрофильный декстран поперечными сшивками, имеющий пористую структуг Благодаря многочисленным гидрофильным группам ? способен разбухать в воде и водных растворах соле образуя гель, который может выполнять роль молек лярного сита при разделении веществ разной молек лярной массы. Размер пор этого сита определяется ч стотой поперечных сшивок в декстране: чем ближе ра положены поперечные сшивки, тем плотнее пространс венный каркас геля и соответственно меньше спосо ность сефадекса связывать воду.

Если раствор, содержащий вещества различной ^ лекулярной массы, пропустить через колонку, заполне ную гелем сефадекса, то более мелкие молекулы пр

146

никнут во внутреннюю часть гельобразующих гранул, и в результате их миграция через колонку будет замедлена. В то же время вещества большей молекулярной массы не проникают внутрь гранул геля и мигрируют-быстрее мелких молекул. Разные скорости миграции: приводят к разделению веществ при их прохождении через «молекулярные сита».

Фирма Pharmacia (Швеция) выпускает 18 типов сефадексо» (без ионообменных свойств), которые различаются частотой по-пеперечных сшивок. Важнейшие свойства сефадексов приведены в табл. 4 приложения II. Символ, указывающий тип сефадекса (G-25, G-50 и т. д.), обозначает пористую структуру (G) и величину поглощения воды на 1 г сухой массы сефадекса, т. е. указывает частоту поперечных сшивок декстраяа. У сефадексов с высоким значением индекса цифра указывает нижний пиедел молекулярной массы веществ (в тысячах), не проникающих внутрь гранул геля. Например, вещества с молекулярной массой меньше 100 ООО могут проникать внутрь гранул сефадекса G-1O0, тогда как вещества с более крупными молекулами выходят в раствор.

Благодаря перечисленным выше свойствам сефадексы широко, используются при изучении структуры белков. Чаще всего и« применяют для разделения белков в зависимости от молекулярной: массы, для очистки белковых фракций, для концентрирования разбавленных растворов белка и для обессиливания белковых препаратов.

t

Фракционирование с помощью полиакриламидного геля дает такие же результаты, как и гельфильтрация на сефадексе. В отличие от природного декстранового геля, каким является сефадекс, полиакриламидный гель 'Представляет собой гель синтетического полимера, обладающ

страница 52
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
купить земельный участок по новориге
садовые металлические скамейки ,стулья, урны.
тачка для перевозки грузов
dali dimmer 220v

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.04.2017)