химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ь имеет структуру трехмерной сетки. Вязкость, эластичность и прочность геля зависят как от степени полимеризации, так и от степени сшивки (системы гелей для диск-электрофореза приведены в табл. 8 приложения II).

При диск-электрофорезе используют пары буферов Разного состава и с разными значениями рН, а носитель состоит из отдельных слоев геля, различающихся по Размерам пор. Благодаря этому разделяемые вещества концентрируются сначала в очень узкой стартовой зоне, что имеет решающее значение для четкого разделения смеси.

Высокая разрешающая способность диск-электрофо-Реза базируется на двух физических явлениях: эффекте к°нцентрирования и эффекте молекулярного сита. При Разделении растворимых компонентов смеси веществ эта СМесь сначала концентрируется в узкой полосе крупнопористого полиакриламидного геля, а затем в мелкопо-Мстом геле ее компоненты распределяются по величи-е> Форме и заряду молекул.

При диск-электрофорезе обычно пользуются малень-ими колонками полиакриламидного геля, состоящими ля ^В^Х частеи: крупнопористого концентрирующего ге-щ' в котором происходит концентрирование подлежа-х Разделению веществ, и мелкопористого разделяю137

к

щего геля, в котором эти вещества разделяются. В ко ? лект установки для диск-электрофореза входят таь электроды, сосуды для электродов, заполненные буф. ным раствором, и источник питания.

Ионы, движущиеся во время электрофореза в од1 направлении с фракционируемыми веществами и об, ловливающие эффект концентрирования, можно разб:; на два типа: ведущие и замыкающие. В начале ра; ления ведущие ионы находятся во всех частях коло! а замыкающие — только в электродном буфере.

Значения рН буфера и концентрирующего геля бирают так, чтобы ионы по эффективной подвижно располагались в следующем ряду: ведущие ионы, бе.г замыкающие ионы. Так как подвижность белков \ колько ниже подвижности ведущих ионов, но выше г. вижности замыкающих ионов, белки концентрирую в узкой зоне, передним фронтом которой служит в. вижная граница. Отдельные белки последовательно j, полагаются в колонке между ведущими и замыкаю1. ми ионами в соответствии со своей подвижностью, разуя диски толщиной в несколько микрон.

Когда движущаяся белковая зона, «втиснутая» м> ду ведущими и замыкающими ионами, достигает гра цы между концентрирующим и разделяющим геля-она встречается с двойным «нарушением непрерыв сти», так как разделяющий гель характеризуется л гими значениями рН и другими размерами пор. Но значение рН в разделяющем геле подбирают с та!, расчетом, чтобы степень диссоциации замыкаюг-ионов увеличилась во много раз. В результате замык щие ионы приобретают подвижность, близкую к п вижности ведущих ионов, поэтому они перегоняют С-ки и движутся впереди них непосредственно за вед>'1); ми ионами. При этом происходит изменение электрГ ского поля, и теперь уже белки движутся в облает постоянной напряженностью поля и с постоянным з" пением рН; здесь они подвергаются истинному зона-ному электрофорезу и разделяются по своим размер3 форме и электрическому заряду молекул. У белков разной молекулярной массой, даже если они облада1' одинаковой свободной подвижностью, скорость дв«*' ния тоже оказывается различной, и тем самым до?'' гается их разделение,

138

Таким образом, сочетание эффекта концентрирования п эфФекта молекулярного сита при диск-электрофорезе обусловливает в конечном счете высокую разрешающую способность этого метода. Из сказанного ясно, что необходимо всегда учитывать влияние величины рН на вещества, подлежащие разделению с помощью диск-электрофореза.

Общий принцип состоит в том, что буферная система должна обеспечивать максимальное разделение веществ, не изменяя ни их растворимость, ни химическую и биологическую устойчивость. Разделяемые вещества при значениях рН концентрирующего и разделяющего гелей должны нести заряд того же знака, что и ведущие и замыкающие ионы. Величина рН раствора разделяемых веществ должна быть такой, чтобы при внесении его в колонку заметного изменения рН концентрирующего геля не происходило. Поэтому перед внесением раствора рекомендуется измерять рН и; если необходимо, доводить его до величины рН буфера ±0,75.

Прибор для проведения диск-электрофореза завода «Реанал», модель 71, показан на рис. 18, а. Основными частями прибора являются два квадратных, вертикально расположенных сосуда> для электродных буферов, соединенных с помощью ножек. Имеющиеся в середине сосудов углубления в форме круга служат для закрепления цилиндрических электрод-держателей. Отверстия, просверленные на сторонах электрод-держателя, позволяют электродам не быть зависимыми от уровня буфера. Электроды имеют спиральную форму, изготовлены °нн из специального сплава.

Под разливку гелей и для их закрепления на время электрофоретического процесса используются стеклянные трубочки 4 длиной 100 и внутренним диаметром 6 мм и трубочки 3 длиной 120 и внутренним диаметром 12 мм. "а время электрофореза трубочки закрепляются в основании верхнего сосуда в резьбовых отверстиях. Для ан

страница 49
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
взятие урологических мазков
обслуживание чиллеров aermec
волейбольная юбка
интерьер домашний кинотеатр

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.10.2017)