химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

онит суспендируют в кислом компоненте рабочего буфера с таким расчетом, чтобы величина была около 4,5. Суспензию помещают в бюхнеровску10 колбу с магнитной мешалкой и подсоединяют к вакуу-м' н0й системе, способной обеспечить разрежение ниже ]ЗкПа. Откачка продолжается до тех пор, пока не прекратится выделение пузырьков. Слишком глубокий ва-куум нежелателен, так как жидкость может «закипеть». Далее к смеси добавляют щелочной компонент буфера с таким расчетом, чтобы получить нужное значение рН, и суспензию сразу же вносят в колонку.

Оптимальный объем суспензии порошковых деллю-лозных материалов при внесении .в колонку составляет 150% от объема слоя набухшего обменника после его оседания в мерном цилиндре при отмучивании.

Как только вся суспензия оказалась в колонке, последняя немедленно подключается к системе, прогоняющей через колонку буфер со скоростью 45 см3/ч на 1 см2 поверхности, что при наличии тока жидкости предотвращает конвекционные потоки в оседающем ионообмен-нике.

Не рекомендуется оставлять ионообменник с адсорбированным материалом на ночь. Необходимо помнить, что целлюлозные порошки во влажном состоянии сравнительно быстро разрушаются цел-люлолитическими ферментами бактерий и грибов. Поэтому буферные растворы по возможности должны содержать антисептик.

Несмотря на сравнительную инертность целлюлозной и дек-страновой матрицы периодические контакты со Щелочью и кислотой при регенерации способствуют расщеплению гликозиднысх и галак-тоэидных овязей соответственно, что приводит к постепенной деградации матрицы. Этому же способствуют и механические факторы при размешивании и ресуопендировании. В результате в препарате накапливаются мельчайшие частицы, резко замедляющие фильтрацию растворов.

После заполнения колонки рекомендуется наслоить 0.5 см сефадекса G-25, растворенного в том же буфере, чтобы защитить поверхность ионообменника. Высота слоя ионообменника 20 см обычно бывает достаточной, чтобы вещества адсорбировались слоем 1—2 см. Диа-Метр ;выбирают в зависимости от требуемой поверхности "онообменника.

Второе занятие

На втором занятии осуществляются следующие операции:

нанесение анализируемого образца и элюция белка; Определение оптической плотности и ферментативной Живности во фракциях.

134

135

Нанесение анализируемого образца и элюция белк;; Анализируемый образец на колонку наносится обычн, образом.

Десорбция белка с ионообменника достигается Л1 путем увеличения концентрации соли в растворе, ли путем изменения рН раствора. Существуют два способ создания градиента концентрации: непрерывный и ступенчатый. Каждый из способов создания градиент., имеет свои недостатки и преимущества и в связи с эти,-собственные области применения. Непрерывный спосо; создания градиента применяется значительно чаще, 8 аналитических работах он занимает монопольное положение.

Определение оптической плотности и ферментативной активности во фракциях. Оптическая плотность каждой фракции измеряется на фотоэлектроколориметре пр светофильтре с максимумом светопропускания при / = 280 нм. После измерения оптической плотности р,. творы используют для определения ферментативной тивности (двух и более ферментов). Методики опре. ления соответствующей активности ферментов да в главе I.

После анализа всех фракций составляется прото!-наблюдений, включающий описание ферментного пре; рата (его активность, содержание в нем белка, объ пробы, нанесенной на колонку), колонки (ее диаж и высоту, тип ионообменника, градиент, скорость эл' ции), результаты анализа полученных фракции (их ; тивность в ед./см3). В заключение строится хрома: грамма.

Лабораторная работа № 8

Диск-электрофорез белков и ферментов

Разделение белков и ферментов с помощью ди< электрофореза имеет ряд преимуществ перед обычн' ми методами зонального электрофореза: возможное исследовать малые количества материала (1 —100 мк" работать с разбавленными растворами веществ, под-' жащих разделению, простота аппаратуры, быстро' разделения (30—60 мин), высокая разрешающая сг собность для молекул различного размера и формы, х136 оошая воспроизводимость разделения. Благодаря этим достоинствам метод применяется для самых разнообразных целей: для испытания чистоты препаратов и хро-матографических фракций, оценки методов экстракции, очистки и т. д.

Диск-электрофорез применяется не только для аналитических целей, но и для препаративного разделения, а также в качестве ультрамикроаналитического метода, когда количество вещества измеряется в нано- и пикограммах.

Диск-электрофорез представляет собой метод, в котором используется неоднородная разделяющая система с полиакриламидным гелем в качестве носителя.

Полиакриламидный гель представляет собой продукт сополи-меризации акриламида СНг=СН—СО—NH2 и какого-либо сшиваюЩЕГО агента, чаше всего N'N'-метиленбисакрпламида: СН2—СН— -СО—NH—СН2—NH—СО—СН=СН2. Благодаря образованию поперечных связей между растущими соседними полиамриламидными цепями, возникающими в результате полимеризации винильных групп, такой гел

страница 48
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
dots costa azul
домановой риге
Дизельные котлы Unical Ellprex TX N 1900
клапан кпс-1м 60 но-мв 220 вес

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)