химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

тором является стабильность белка, в частности фи мента. Суммарный заряд белковой молекулы являе! функцией рН. Ниже изоэлектрической точки белок ИУН-суммарный положительный заряд и адсорбируется ка онообменником. Выше изоэлектрической точки белок : сет суммарный отрицательный заряд и может адсорГ роваться анионообменником. В этом случае вы( ионообменника определяется зоной рН-стабильности следуемого белка.

В случае отсутствия данных об изоэлектричес;< точке белка проводят предварительные испытания. Л' испытания анионообменника готовят буфер с рН 8,0 для катионообмеиника — с рН 5,0. Отвешивают по 0,.г' каждого ионообменника в отдельную пробирку и доб-ляют по 30 см3 соответствующего буфера 0,1 М. Ур новешивают ионообменник путем его промывания е как минимум двумя равными объемами буфера. Да ионообменнику осесть и сливают супернатант так, 4 бы объем, занимаемый ионообменником, был раи

132

Ю см3. К каждому ионообменнику добавляют равное количество раствора фермента. Суспензию перемешивают, чтобы весь ферментный раствор проконтактировал с ионообменником. После оседания взвеси супернатант отделяют и в нем определяют активность исследуемого фермента. Отсутствие активности в супернатанте свидетельствует об адсорбции активного белка ионообменником.

Подготовка ионообменника. Независимо от того, в какой форме находится ионообменник, при первом использовании его желательно последовательно обработать кислотой и щелочью, чтобы обеспечить регенерацию, удаление следов тяжелых металлов и получение нужной формы. Последнее обстоятельство определяет последовательность обработки кислотой или щелочью, концентрация которых при работе с целлюлозным или декстрановым материалом никогда не должна превышать 0,5 н., а продолжительность контакта должна ограничиваться 2 ч.

Так, если при работе с анионятами типа ДЭАЭ желательно получить обменник в ОН_-форме, то вначале его суспендируют в 0,5 н. растворе НС1, а затем в 0,5 и. растворе NaOH. Если желательна С1_-форма, то последовательность операций должна быть обратной. Аналогичная последовательность обработки применяется я в отношении катионитов. Объем кислоты и щелочи, применяемых в этих случаях, должен как минимум в 15 раз превосходить объем навески обменкика.

Вначале навеску обменника суспендируют в дистиллированной воде или в слабом буфере для набухания. В случае ионообменных сефадексов эта операция выполняется по прописи, приведенной в разделе «Исследование ферментов методом гель-фильтрации».

В случае целлюлозных порошков и гранулированной Целлюлозы специальная стадия набухания может быть °пУЩена и совмещена с отмучиванием.

Для целлюлозных анионитов рекомендуется после ^скольких часов набухания в слабом буфере (0,005— .01 м, рН 7,0) суспендировать ионообменник в свежей °РЦнн буфера из расчета 1 г сухого порошка на 30 см3 раствора. Если для анализа используется уже бывший работе сырой ионообменник, достаточно 6 см3 раство-ца на 1 г массы. После тщательного перемешивания в

Рном цилиндре суспензию оставляют отстаиваться.

133

к

Набухший и отмученный декстрановый или целлюлозный ионообменник (или сухой целлюлозный поро. шок) суспендируют в 15 объемах кислоты или щелочи (0,5 н.) и оставляют на 30—60 мин при комнатной тем. пературе. Слишком энергичного размешивания следует избегать как на этой, так и на всех последующих стадиях. Надосадочную жидкость сливают или отфильтровывают, а осадок промывают дистиллированной водой до слабокислой реакции среды (рН 4,0) при отмывании от кислоты или до слабощелочной реакции (рН 8,0) при отмывании от щелочи. Отмытый осадок снова суспендируют в 15 объемах 0,5 н. раствора щелочи (при предыдущей обработке кислотой) или 0,5 н. раствора кислоты (при предыдущей щелочной обработке). После 30 мин инкубации надосадочную жидкость сливают и осадок, не промывая, заливают свежей порцией такого же раствора, чтобы обеспечить полное замещение нужным про-тивоионом. Далее материал отмывают на фильтре дистиллированной водой до нейтральной реакции.

Регенерированный ионообменник подвергают либо непродолжительному отмыванию, либо, наоборот, тщательному промыванию буферными растворами. За последней операцией закрепился специальный термин «уравновешивание». Необходимость промывания ионо-обменников после регенерации буферными растворами диктуется тем, что при адсорбции белков и при последующем элюировании рН раствора ,в колонке может резко изменяться. Поэтому регенерированный ионообменник должен быть отмыт слабым буфером. Эта операция в ряде случаев нужна также для того, чтобы обеспечить требуемую величину рН и ионной силы в момент адсорбции. До этих же величин рН и ионной силы доводится и опытный раствор, наносимый на колонку.

Подготовка колонок и внесение ионита. Ионообменные сефадексы вносятся в колонку так же, как и обычные сефадексы соответствующих номеров,— после преД' варительной деаэрации суспензий. Последняя особенно важна в случае анионитов, связывающих СОг- Деаэрацию в этом случае рекомендуется выполнять следующие образом: ани

страница 47
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
металлочерепица цена в чистополе
купить navi pilot для тойота alphard
курсы массажист универсал в москве с сертификатом цена
хочу купить билет на концерт орбакайте в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)