химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ответствующим буфером переносят в мерную колбу на 50 см3 (исходный объем). Полученные растворы являются исходным материалом для анализа.

Анализ препаратов. Обычно не принято в такого Рода опытах высушивать полученные препараты, так как пРи высушивании возможна дополнительная инактивация ферментов, что искажает общую картину высали-Вания. Поэтому, как было сказано выше, осадок сразу -*е после декантации надосадочной жидкости растворяет и доводят объем раствора до исходного объема ферментного раствора до высаливания, т. е. до 50 см3. Обычно осадок до конца не растворяется ввиду частички денатурации белка и поэтому при отборе проб для

5 ЗАК 791 129

определения содержания в осадке белка, углеводов, ; лы и т. д. содержимое колбы тщательно переметив ется.

Активность ферментов определяется в фильтра после отбора проб на общий анализ. Методики анали препаратов можно выбрать в главе I. Все полученн:, результаты исследования вносят в протокол наблю,:., ний и статистически обрабатывают.

Протокол имеет следующий вид:

Продуцент фермента

Осадитель

Содержание сухих веществ в исходной ферментном растворе—

Активность ферментов ед./см3 исходного раствора,

ед./г сухих веществ, ед./мг белка

л Выход осадка X ед. ФА в исходном растворе X ед. ФА во всем

препарате Количество активного фермента, перешедшего в осадок, % Характеристика препарата

г на 100 см' исходного раствора % от сухих веществ исходного раствора

активность содержание, %

ед. ФА/г ед. ФА/мг

белка белка углеводов 5

Методика проведения процесса высаливания с ук-' занием всех участвующих в определениях объемов разведений записывается как можно подробнее.

§ 3. ИЗУЧЕНИЕ НЕКОТОРЫХ СВОЙСТВ ФЕРМЕНТОВ

Лабораторная работа №7

Ионообменная хроматография белков

Ионообменная хроматография, получившая за Л' следнее время широкое распространение в химии и би-1 химии, в принципе, сводится к двум операциям: связыванию обменником исследуемых ионов и их послед)''" щему дифференциальному элюированию, в процесс которого достигается разделение этих ионов. ПервЫ'

130

процесс проводится в условиях, обеспечивающих максимальное взаимодействие исследуемых соединений с обменником. Обычно для достижения этого состояния необходима низкая ионная сила раствора и такая величина рН, которая способствует максимальной ионизации компонентов исследуемой смеси.

Сорбируемость белков на обменниках определяется з основном электростатическими силами, поэтому решающее значение при выборе обменника и условий сорбции имеют величина заряда, рН и ионной силы раствора. В слабых буферных растворах, когда влиянием последнего фактора можно пренебречь, следует руководствоваться изоэлектрической точкой белка, которая дает представление о величине суммарного заряда и рН раствора.

Интенсивное использование хроматографических методов для фракционирования различных высокомолеку-' .тарных белков началось после введения в биохимическую практику целлюлозных ионообменников, а позднее— ионообменных полимеров декстрана (сефадекс), обладающих в отношении белков сравнительно высокой емкостью и низкой величиной необратимой адсорбции (см. табл. 4 приложения II).

Амфотерность белков обусловливает ряд особенностей ионообменного процесса, в частности возможность проведения как анионообменной, так и катирнообменной хроматографии, хотя по ряду причин первый вид предпочтительнее. Большая популярность анионитов обусловлена тем, что подавляющая часть белков представляет собой слабокислые электролиты, которые в нейтральных средах ведут себя как анионы. Поскольку нейтральные среды являются областями наибольшей стабильности белков, а в таких условиях адсорбционная емкость максимальна у анионитов, то это и определяет выбор ионообменника.

Если обозначить ионогеиные группы белка через

~~°ОС—R—NH+, то его реакцию обмена с аниониТом (I) или катионитом (II) можно записать следующим образом

I ОБ+ОЦ- + -ООС—R—NH + ^tOB+ ~ООС—R—NH2 + НаО П ОБ-Н+ -|- +NH,—R—COO-^tOB- +NH,—R—СООН

Б* 131

При хроматографии белков на анионообменниках рЦ элюирующего раствора должен быть выше изоэлектри-ческой точки. В обоих случаях будет иметь место перезарядка белка. В результате белковая молекула приобретет заряд того же знака, что и обменник, и между ними возникнут силы электрического отталкивания, т. е. создадутся условия для десорбции и элюирования. Белки будут диффундировать в растворитель и вместе проходящим через ионообменник раствором элюента f дут выводиться из колонки.

Целью настоящей работы является фракционирование комплексного ферментного препарата и его последующее исследование. Работа проводится в два занятия.

Первое занятие

На первом занятии студент осуществляет следующие операции:

выбирает подходящий ионообменник;

готовит ионообменник;

готовит колонки и вносит ионит.

Выбор подходящего ионообменника. В адсорбции ной хроматографии белков могут быть использованы в. анионо-, так и катионообменникн. Лимитирующим ф.:

страница 46
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
Продажа участков в поселке Николино
гольфыволейбольные женские asics заказать
k200l вентилятор схема
cm-a 3-2

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(27.02.2017)