химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ишь какке-то чрезвычайные ^обстоятель-сгва могут оправдать проведение эксперимента в одной повторно-сти. Как неукоснительное правило, принято проводить опыты в трех (редко в двух) и более ловториостях. Это позволяет рассчитать среднеарифметические оценки измеряемых параметров, убедиться в отсутствии грубых ошибок, рассчитать доверительные-ошибки полученных оценок (см. приложение I, § 1). Ввиду большого объема экспериментов даиная работа может быть проведена в 2 занятия, но объекты анализа должны быть обеспечены гарантированными условиями хранения» предусматривающими стабильность ферментов л сохранение ими активности.

ОСАЖДЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ СОЛЯМИ

Объектом высаливания могут быть фильтрат или концентрат культуральной жидкости продуцентов различных ферментов, а также экстракты из поверхностных культур микроорганизмов с концентрацией сухих веществ 7—10%.

Работа состоит из следующих операций:

подготовка объекта исследования;

осаждение ферментов солями;

анализ препаратов. *

Подготовка объекта исследования. В данной лабораторной работе процесс высаливания рассматривается на примере осаждения комплекса амилолитических ферментов из глубинной культуры Endomycopsis fibuliger сульфатом аммония.

При глубинном культивировании этот дрожжеподоб-Ный организм образует комплекс ферментов: а-амилазу, тлюкоамилазу и гликозилтрансферазу. Для дальнейше-г° использования препаратов из данной культуры нежелательно присутствие в них гликозилтрансферазы. Из литературы известно, что высаливанием сульфатом ам-ч°ния при определенной его концентрации достигается

127

фракционирование комплекса ферментов и в осадок вы падает преимущественно глюкоамилаза без сопутствуй,, щей ей гликозилтрансферазы.

Культуральная жидкость Endomycopsis fibuliger концентрируется методом ультрафильтрации до содержании сухих веществ в концентрате 5—7%. В этом концентр; те определяется содержание сухих веществ (рефракт<. метрически), рН (потенциометрически), активность ц глюкоамилазы и гликозилтрансферазы, содержание бел ка.

Полученные данные заносятся в протокол наблюдений. Активности ферментов рассчитываются на 1 см концентрата, на 1 г сухих веществ и на 1 мг белка.

Осаждение ферментов солями. При проведении это работы можно предложить следующие варианты зада»'

I —? изучение влияния концентрации сульфата аммони

на осаждение ферментов, их фракционирование частичное освобождение от балласта (берется кок центрация соли 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 и 100°, от полного насыщения);

II — изучение влияния рН ферментного раствора н

полноту осаждения при определенной концентрации соли (рН 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9);

III — изучение влияния концентрации сухих веществ :ферментном растворе на процесс осаждения (кон центрация СВ 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0 7,0%);

IV — изучение влияния температуры и длительности высаливания на полноту осаждения ферментов (тем пература 5, 20 и 35°С, длительность высаливанП" 0,25; 1,0; 2,0 ч).

Рассмотрим порядок выполнения работы на приме ре I варианта. Каждый опыт проводится в трех парад дельных пробах, одна из которых предназначена дли определения массы (выхода) препарата, а две другие-для определения всех показателей в препаратах.

Осаждение проводится всей группой студентов из одного концентрата или фильтрата культуральной жидкости. Точно записывается режим осаждения (например-температура 20°С, длительность высаливания 1 ч, выдержка 30 мин; осадок отделяется на центрифуге пр" частоте вращения 8000 мин-1 в течение 20 мин и т. Д-)

Осаждение проводится из 50 см3 ферментного раство128 ра. Чтобы за осаждением легко было наблюдать, целе-с0образно высаливание проводить в стеклянных высоких стаканах вместимостью 150 см3.

Перед взвешиванием сульфат аммония тщательно измельчают в ступке, просеивают через шелковое сито с размером отверстий 0,1 мм и взвешивают на технических весах в выпарные чашки с точностью до десятых.

В каждый стакан вносят пипеткой Мора по 50 см3 ферментного раствора с температурой 20°С. Туда же опускают тонкую стеклянную палочку с резинкой на конце. Соль вводят в ферментный раствор очень медленно, маленькими порциями, при постоянном помешивании. Следующую порцию соли вводят в раствор только после того, как предыдущая порция растворится. После введения всей соли ее остатки из выпарной чашки можно смыть тем раствором, в который она вносилась. Затем стакан оставить в покое на некоторое время. При небольших насыщениях целесообразно поместить стакан на некоторое время в холодильник.

Когда осадок сформируется, его отделяют центрифугированием, содержимое оДного центрифужного стакана после декантации надосадочной жидкости переносят 50%-ным этанолом (5—10 см3) в предварительно доведенный до постоянной массы бюкс (спирт добавляется Для ускорения высушивания) и высушивают осадок до постоянной массы в вакуум-сушильном шкафу или в обычном сушильном шкафу при 105°С.

Две другие пробы также переносят в центрифужные стаканы, центрифугируют, жидкость декантируют, а осадок дистиллированной водой или со

страница 45
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
http://taxiru.ru/laytboks-u/
виды ламп в рекламе
спектакль маленькие комедии
наклейки кубики 2х2

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(19.09.2017)