химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

при частоте вращения ротора 8000—10000 мин-1. Затем центрифугу выключают и после полной остановки ротора вынимают стаканы, Надосадочную жидкость декантируют, а содержимое того стакана, масса которого известна, ставят на высушивание до постоянной массы при 105°С на 3—4 ч — определяют выход осадка по сухой массе. Две другие пробы являются параллельными, и в них определяют активности ферментов, содержание углеводов, белка, золы.

Чтобы избежать лишних пересчетов, содержимое каждого центрифужного стакана осторожно очень малыми порциями воды смывают при интенсивном перемешивании и растворении в мерную колбу на 25 см3, т. е-объем растворенного осадка точно равен объему исходного ферментного раствора, пошедшего на осаждение.

Несколько сложнее проводится эксперимент, если требуется очень точно определить содержание ферментов в осадке и в надосадочной жидкости. Тогда посЛе декантации надосадочной жидкости к осадку добавляют

124 осадитель той же концентрации, что была принята для данного опыта, перемешивают осадитель с осадком и вновь центрифугируют, так повторяют 2—3 раза. Все промывные смеси из одного стакана объединяют с первой надосадочной жидкостью.

Если изучаемый фермент очень лабилен, следует анализировать его в центрифуге с охлаждением и держать при всех манипуляциях в емкости, опущенной в ледяную баню.

При изучении влияния на степень осаждения ферментов величины рН среды раствор обычно 'подщелачивают аммиаком (10%-ным раствором) или подкисляют серной кислотой (6%-ным раствором), контроль за величиной рН ведется по потенциометру. Так как объем меняется, подтитровка проводится сразу 75 см3 ферментного раствора и объем после достижения нужного значения рН доводится до 100 см3. Это разведение (75 см3 исходного раствора до 100 см3) учитывается при балансовых расчетах.

Анализ полученного осадка. Массу осадка, полученную после высушивания центрифугированной пробы (25 см3) до постоянной величины, определяют в двух параллельных образцах по разности масс центрифужного стакана с раствором до осаждения и после осаждения ферментов и высушивания. Пересчитав полученную величину на 100 см3, находим выход препарата.

Зная содержание сухих веществ в исходном растворе и приняв его за 100%, можно подсчитать выход препарата в процентах, от исходных сухих, веществ. Осадок после установления его выхода в случае необходимости может быть использован для определения зольности.

Активность ферментов определяют в растворах осадков в тех же разведениях и тем же методом, что и в исходном растворе перед осаждением.

Содержание в растворе белка чаще всего определяют по методу Лоури, либо биуретовым микрометодом по Ярош, либо каким-то другим методом, требующим небольшого количества пробы на анализ.

Содержание углеводов определяют после пРедварительного гидролиза раствора 2%-ной соляной Кислотой в течение 2—2,5 ч по накоплению редуцирующих веществ, которые могут быть определены любым известным методом.

12Е

На определение зольности осадка берут тщатель но перемешанную суспензию осадка (часть осадка не ра. створяется после осаждения), и пробу помещают в ти-гель, предварительно высушенный до постоянной массы Если берут для определения зольности высушенный осадок (это удобнее), то необходимо точно знать навеску, взятую на анализ. Определение зольности ведется обычным методом сжигания в муфельной печи.

Протокол наблюдений по данной работе имеет еле дующий вид:

Наименование продуцента ферментов .

Способ получения ферментного раствора ___

Содержание сухнх веществ в ферментном растворе %

рН ферментного раствора-—

Активность ферментов в экстракте илн фильтрате

культуральной жидкости ед./г

рН исходного раствора Содержание су.тих веществ в исходном растЕоре Характеристика осадка

содержание сухих веществ

в г на 2 5 см» в об. % от результатов в графе 4 в % на 1 00 смэ исходного раствора

в % в г на 25 сма

1 1

Характеристика осадка

ферментативная активность выход активного фермента,

0/

ед. ФА иа 1 см3 исходного раствора X ед. ФА в 25 см3 2 ед. ФА в осадке ед. ФА

на 1 г сухого вещества осадка ед. ФА на 1 мг белка

1

Методика проведения осаждения с указанием всех участвующих в определениях объемов и разведений записывается как можно подробнее.

Если необходимо проанализировать надосадочну10 жидкость, следует предварительно под вентилятором или в вакуум-сушильном шкафу при температуре не выше 28—30 °С удалить растворитель и после этого пр0' вести анализ с учетом всех разведений.

126

В протоколе следует также отразить процентное содержание в препарате углеводов, белка и золы.

Следует построить графические зависимости выхода активности ферментов в осадок в процентах от исходной величины и концентрации растворителя в смеси, а также выхода массы осадка.

В случае изучения влияния рН на полноту осаждения строится зависимость выхода препарата и активности ферментов от величины рН.

Примечание. Все вышесказанное относится к опыту в одной поаторности. Однако л

страница 44
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
кровать 110х200
продажи домов на новой риге
производство скамеек и лавочек
http://www.kinash.ru/etrade/goods/4117/brand/36732/city/Cheliabinsk.html

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(28.06.2017)