химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

бой выпадение белков в осадок. А так как диэлектрическая постоянная для различных осадителей различна, то и концентрация их, вызывающая полное осаждение ферментов, будет различна. Кроме того, ферменты по-разному относятся к различным осадителям, что часто дает возможность фракционировать комплекс ферментов.

Оптимальные условия осаждения определяются экспериментальным путем в каждом конкретном случае. Помимо вида и концентрации органического растворителя и соли на процесс осаждения и сохранение активности ферментов в осадке влияют присутствие в растворе электролитов, температура осаждения, время контакта с растворителем, рН, при котором ведется осаждение, концентрация сухих веществ в ферментном растворе, их состав и т. д.

Целью настоящей работы является изучение влияния природы осадителя и условий осаждения на полноту выпадения в осадок ферментов.

ОСАЖДЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ ОРГАНИЧЕСКИМИ РАСТВОРИТЕЛЯМИ

Работа состоит из следующих операций: приготовление водного экстракта (вытяжки) из поверхностной культуры гриба или фильтрата (концентрата) из глубинной культуры;

определение активности ферментов в вытяжке или Фильтрате;

^ осаждение ферментов органическими растворите-аналпз полученного осадка.

Приготовление водного экстракта (вытяжки) из по-ерхностной культуры гриба или фильтрата (концент121

рата) из глубинной культуры. Способ приготовления вытяжки (экстракта) подробно описан в лабораторной работе № 4 по диализу. Вытяжку следует либо отфильт-ровать, либо тщательно отцентрифугировать, чтобы в ней не было взвеси. Прозрачная вытяжка (экстракт) с содержанием сухих веществ 7—10% является исходным раствором для осаждения ферментов. Для выполнения работы требуется 250—300 см3 экстракта по каждому варианту.

Если предполагается проводить осаждение из глубинной культуры, то прежде всего следует отделить ее от твердой взвеси среды. Это можно -сделать центрифугированием или фильтрацией через бумажный фильтр на воронке Бюхнера.

Если микроорганизм выращивался на обедненной среде, то готовая культуральная жидкость может иметь очень низкое содержание сухих веществ, что затрудняет выделение ферментов в осадок. Желательно повысить содержание сухих веществ любым из известных способов: вакуум-выпариванием, ультрафильтрацией и т. д.

Определение активности ферментов в вытяжке или фильтрате. В зависимости от продуцента ферментов определяется их активность по методикам, приведенным в главе I. Следует только иметь в виду, что так как вытяжка и фильтрат — это концентрированные растворы ферментов, их надо разводить в несколько раз.

Осаждение ферментов органическими растворителями. Вытяжку или фильтрат (концентрат) культуральной жидкости охлаждают до 2—3°С. Осадитель (этиловый спирт, изопропиловый спирт, ацетон) охлаждают предварительно до — 5-.— 10°С. При проведении этой работы можно изучать влияние на полноту осаждения ферментов концентраций осадителя, электролитов, рН ферментного раствора, температуры осадителя и ферментного раствора, длительности контакта осадителя с ферментом и т. д.

Предположим, что в работе поставлена задача изучить влнянИ концентрации осадителя и рН среды на полноту осаждения ферментов из водной вытяжки культуры микроскопического гриб2' обладающего способностью синтезировать а-амилазу и протеаэУ-Вытяжка содержит 9% сухих веществ, ее рН 5,0. и активность ферментов 20 ед.АС/смэ и 5 ед.ПС/см3. Для осаждения используй три осадителя и диапазон рН от 2,5 до 9,0. Для данной конкретной задачи можно предложить варианты, представленные в табл. "?

122

Осаждение лучше всего вести в центрифужных стаканах на 150—200 см3. Осаждение проводится в трех ПаРаллельностях из объема 25 см3 вытяжки или фильтра (концентрата) культуральной жидкости. Две про-бы используются для определения активности ферментов в осадке, третья проба предназначается для опреде. ления выхода препарата по массе.

Рассмотрим порядок проведения эксперимента впер, вом варианте задачи. Вначале из общего объема вытяж-ки или фильтрата перед осаждением отбирается сред, няя проба в количестве 30—50 см3. В ней определяются активности ферментов и содержание сухих веществ.

Для осаждения берут 9 сухих центрифужных стаканов, помечают их, три центрифужных стакана взвешивают с точностью до сотых. Во все девять центрифужных стаканов вливают по 25 см3 охлажденного ферментного раствора. Затем в химические стаканы наливают по тонкой стеклянной палочке необходимое количество осадителя (в первом варианте—ацетона): в три стакана по 25 см;!; в три других — по 37,5 см3; в три следующих— по 50 см3. В каждом варианте осаждения должен быть один взвешенный центрифужный стакан. Химические стаканы с осадителем устанавливают в строгой последовательности непосредственно за штативом с центрифужными стаканами. Затем поочередно при помешивании палочкой осадитель вносят в центрифужный стакан с ферментным раствором. Палочку смывают последними 2—3 см3 растворителя, после чего центрифужные стаканы устанавливают в гнезда ротора. Центрифугирование ведут в течение 5 мин

страница 43
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.02.2017)