химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ения объемов газа. Вторая бюретка или стеклянная трубка служит для быстрой и правильной установки уровня газа при отсчете. Бюретка для измерения в верхней части закрыта резиновой пробкой с отверстием, в которое вставлен маленький тройник. На один конец этого тройника надет кусочек толстостенной эластичной резиновой трубки и винтовой зажим. Второй конец тройника, слегка изогнутый, соединен с длинной резиновой трубкой, закрытой с другой стороны

i-ij/uiiun и другой СТОрОНг.

стеклянной трубочкой с резиновой пробкой. Этой проб кой закрывают реакционную баночку.

Воронку и измерительную часть аппарата заполняют 5%-ным раствором серной кислоты. Серная кислота уменьшает растворимость газов в воде и препятствует размножению водорослей и грибов. Уровень этой жидкости в аппарате устанавливают на нуле. Это достигается закреплением кольца, на котором находится «груша», на постоянной высоте.

Все отверстия для сообщения с воздухом должны быть закрыты ватными пробками. 78

Перед измерением все части аппарата проверяют на герметичность.

' Для определения активности каталазы в толстостенные реакционные баночки, подобранные к прибору, отмеривают по 10 см3 центрифугата, туда же добавляют 10 см3 воды и ставят при помощи пинцета маленький стаканчик с 5 см3 3%-ного раствора пероксида водорода (если концентрация Н202 иная, то его наливают в таком объеме, чтобы при разложении пероксида водорода выделилось 68—70 см3 кислорода). Средняя начальная концентрация пероксида водорода в реакционной баночке в общей смеси составит 0,8%.

Горлышко баночки закрывают пробкой с трубкой, соединенной с измерительной бюреткой прибора, устанавливают баночку в баню с температурой 20°С. Проверяют и регулируют уровень жидкости в приборе, закрывают сообщение с воздухом винтовым зажимом и опускают «грушу» в нижнее положение. После этого вращательным движением опрокидывают стаканчик с пероксидом водорода в банке и в этот же момент пускают секундомер. В течение 10 с содержимое банки взбалтывают (вращательным движением). Баночку опять опускают в водяную баню с температурой 20°С. Для предотвращения вспенивания смеси рекомендуется добавлять 1—2 капли толуола.

Количество выделившегося кислорода определяют, поднимая «грушу» до соответствующего уровня за 10 с до отсчета. Отсчет делают ровно через 1,3 и 6 мин. После каждого отсчета реакционную смесь перемешивают в течение 10 с.

Титр пероксида водорода может быть определен при помощи прибора непосредственно по объему кислорода, выделившемуся при 30-минутной реакции в присутствии каталазы. Для этого поступают точно так же, как и при определении активности фермента. Чтобы определить, какой объем кислорода может быть получен из взятого количества пероксида водорода, применяют для его раз-. ложения масличные семена (льна, подсолнечника и др.), обладающие высокой активностью каталазы.

Определение активности р-глюкозидазы

Метод основан на гидролизе р-глюкозидазой р-глю-козидных связей амигдалина, линамарина и др. Актив79 ность (d-глюкозидазы определяется одновременно с циа-ногенной активностью, в качестве субстрата используют раствор амигдалина. В этом случае наиболее удобно активность в-глюкозидазы учитывать по приросту восстанавливающей способности, связанной с отщеплением глюкозы, а цианогенное действие — по накоплению синильной кислоты.

Активность фермента выражают в микромолях глюкозы и синильной кислоты, полученных при действии фермента за 1 ч, на 100 мг белка или в миллиграммах на 1 г взятого для исследования материала.

Необходимые реактивы. 1%-ный раствор амигдалина (в случае учета только р-глюкозидазы применяют раствор арбутина или салицина)—0,57 г глюкозида растворяют в 100 см3 ацетатного буфера с рН 4,7; 10%-ный раствор серной кислоты.

Техника определения. В 2 конические колбы на 100 см3 наливают по 5 см3 раствора глюкозида и по 20 см3 раствора ферментного препарата (ФП). Для контрольных определений используют 2 другие колбы, в которые наливают по 20 см3 раствора ФП. Колбы с растворами нагревают и кипятят с обратным холодила ником в течение 10—15 мин, охлаждают и приливают по 5 см3 раствора глюкозида. Все колбы закрывают резиновыми пробками с укрепленными внутри пикриновыми бумажками и ставят в термостат с температурой 25°С на 4—,18 ч.

Разведение ФП и время действия фермента подбирают так, чтобы в пробе на момент анализа оставалось до 50% глюкозида от взятого исходного вещества. По истечении установленного времени действие фермента приостанавливают прибавлением 2 см3 10%-ного раствора серной кислоты.

Активность цианогенного фермента определяют по изменению окраски пикриновой бумажки, сравнивая1 окраску со стандартной шкалой. По приросту сахара, образующегося в результате гидролиза глюкозида, определяют накопление р-глюкозидазы (сахар определяют полумикрометодом). Разница в содержании сахара между опытными и контрольными пробами получается тем больше, чем выше активность {5-глюкозидазы при одних и тех же условиях проведения опыта,

80

ГЛАВА II

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБ

страница 29
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
земля на новой риге без подряда
дверные ручки из керамики для межкомнатных дверей
спермограмма цена москва на дому
как вытянуть мятое заднее правое крыло на калине универсал

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.07.2017)