химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ения объемов газа. Вторая бюретка или стеклянная трубка служит для быстрой и правильной установки уровня газа при отсчете. Бюретка для измерения в верхней части закрыта резиновой пробкой с отверстием, в которое вставлен маленький тройник. На один конец этого тройника надет кусочек толстостенной эластичной резиновой трубки и винтовой зажим. Второй конец тройника, слегка изогнутый, соединен с длинной резиновой трубкой, закрытой с другой стороны

i-ij/uiiun и другой СТОрОНг.

стеклянной трубочкой с резиновой пробкой. Этой проб кой закрывают реакционную баночку.

Воронку и измерительную часть аппарата заполняют 5%-ным раствором серной кислоты. Серная кислота уменьшает растворимость газов в воде и препятствует размножению водорослей и грибов. Уровень этой жидкости в аппарате устанавливают на нуле. Это достигается закреплением кольца, на котором находится «груша», на постоянной высоте.

Все отверстия для сообщения с воздухом должны быть закрыты ватными пробками. 78

Перед измерением все части аппарата проверяют на герметичность.

' Для определения активности каталазы в толстостенные реакционные баночки, подобранные к прибору, отмеривают по 10 см3 центрифугата, туда же добавляют 10 см3 воды и ставят при помощи пинцета маленький стаканчик с 5 см3 3%-ного раствора пероксида водорода (если концентрация Н202 иная, то его наливают в таком объеме, чтобы при разложении пероксида водорода выделилось 68—70 см3 кислорода). Средняя начальная концентрация пероксида водорода в реакционной баночке в общей смеси составит 0,8%.

Горлышко баночки закрывают пробкой с трубкой, соединенной с измерительной бюреткой прибора, устанавливают баночку в баню с температурой 20°С. Проверяют и регулируют уровень жидкости в приборе, закрывают сообщение с воздухом винтовым зажимом и опускают «грушу» в нижнее положение. После этого вращательным движением опрокидывают стаканчик с пероксидом водорода в банке и в этот же момент пускают секундомер. В течение 10 с содержимое банки взбалтывают (вращательным движением). Баночку опять опускают в водяную баню с температурой 20°С. Для предотвращения вспенивания смеси рекомендуется добавлять 1—2 капли толуола.

Количество выделившегося кислорода определяют, поднимая «грушу» до соответствующего уровня за 10 с до отсчета. Отсчет делают ровно через 1,3 и 6 мин. После каждого отсчета реакционную смесь перемешивают в течение 10 с.

Титр пероксида водорода может быть определен при помощи прибора непосредственно по объему кислорода, выделившемуся при 30-минутной реакции в присутствии каталазы. Для этого поступают точно так же, как и при определении активности фермента. Чтобы определить, какой объем кислорода может быть получен из взятого количества пероксида водорода, применяют для его раз-. ложения масличные семена (льна, подсолнечника и др.), обладающие высокой активностью каталазы.

Определение активности р-глюкозидазы

Метод основан на гидролизе р-глюкозидазой р-глю-козидных связей амигдалина, линамарина и др. Актив79 ность (d-глюкозидазы определяется одновременно с циа-ногенной активностью, в качестве субстрата используют раствор амигдалина. В этом случае наиболее удобно активность в-глюкозидазы учитывать по приросту восстанавливающей способности, связанной с отщеплением глюкозы, а цианогенное действие — по накоплению синильной кислоты.

Активность фермента выражают в микромолях глюкозы и синильной кислоты, полученных при действии фермента за 1 ч, на 100 мг белка или в миллиграммах на 1 г взятого для исследования материала.

Необходимые реактивы. 1%-ный раствор амигдалина (в случае учета только р-глюкозидазы применяют раствор арбутина или салицина)—0,57 г глюкозида растворяют в 100 см3 ацетатного буфера с рН 4,7; 10%-ный раствор серной кислоты.

Техника определения. В 2 конические колбы на 100 см3 наливают по 5 см3 раствора глюкозида и по 20 см3 раствора ферментного препарата (ФП). Для контрольных определений используют 2 другие колбы, в которые наливают по 20 см3 раствора ФП. Колбы с растворами нагревают и кипятят с обратным холодила ником в течение 10—15 мин, охлаждают и приливают по 5 см3 раствора глюкозида. Все колбы закрывают резиновыми пробками с укрепленными внутри пикриновыми бумажками и ставят в термостат с температурой 25°С на 4—,18 ч.

Разведение ФП и время действия фермента подбирают так, чтобы в пробе на момент анализа оставалось до 50% глюкозида от взятого исходного вещества. По истечении установленного времени действие фермента приостанавливают прибавлением 2 см3 10%-ного раствора серной кислоты.

Активность цианогенного фермента определяют по изменению окраски пикриновой бумажки, сравнивая1 окраску со стандартной шкалой. По приросту сахара, образующегося в результате гидролиза глюкозида, определяют накопление р-глюкозидазы (сахар определяют полумикрометодом). Разница в содержании сахара между опытными и контрольными пробами получается тем больше, чем выше активность {5-глюкозидазы при одних и тех же условиях проведения опыта,

80

ГЛАВА II

ЛАБОРАТОРНЫЕ РАБ

страница 29
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
закон по страхованию легковых такси
помято крыло гранта цены за починку
закон 902 о рекламе
вечера на хуторе кт маяковского купить илет

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)