химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

затем добавляют 0,5 см3 1 н. раствора НС1 и непрерывно перемешивают при температуре 80—90°С в течение 1 ч. Затем раствор охлаждают, доводят до рН до 7,0 раствором NaOH, объем доводят до 1 дм3 дистиллированной водой и полученный раствор фильтруют.

Приготовление ферментного раствора. 200 мг испытуемого образца растворяют в 200 см3 дистиллированной воды. Фермент разводят таким образом, чтобы разница между контрольным и опытным титрованием раствором NaOH равнялась от 0,8 до 1,5 мг.

Техника определения. 5 см3 эмульсии субстрата и 4 см3 буфера с рН 7,0 помещают в колбу Эрленмейера На 100 см3, которую закрывают пробкой. Смесь выдерживают на водяной бане при температуре 37°С в тече75 ние 10 мин. Затем к смеси добавляют 1 см3 раствора фермента и хорошо перемешивают. Полученную смесь выдерживают при температуре 37°С в течение 60 мин, после чего немедленно добавляют 30 см3 этанола для прекращения реакции. Раствор титруют 0,05 н. раствором NaOH в присутствии 1%-ного раствора фенолфталеина до исчезновения окраски.

Контрольную пробу готовят следующим образом. К смеси субстрата и буфера с рН 7,0, выдержанной при 37°С, добавляют 30 см3 этанола, затем 1 см3 ферментного раствора и смесь немедленно титруют.

Разность между результатами титрований контрольной и опытной проб соответствует количеству 0,05 н. раствора NaOH, которое пошло на нейтрализацию жирных кислот, образовавшихся из оливкового масла под действием фермента.

Липазную активность фермента ЛС (в ед./г) определяют по формуле ЛС = АТ-50/В, где А — разность между результатами титрований опытной и контрольной Проб, см3; Т — титр щелочи; В — концентрация образца ферментного раствора, г/см3.

Определение активности пероксидазы (ПА)

Метод основан на определении скорости реакции окисления бензидина до образования синего продукта окисления определенной концентрации, заранее устанавливаемой на фотоэлектроколориметре.

Необходимые реактивы. Ацетатный буфер с рН 4,7; раствор бензидина в ацетатном буфере — в мерную кол-бу^на 200 см3 наливают около 100 см3 дистиллированной воды, прибавляют 2,3 см3 ледяной уксусной кислоты и 184 мг бензидина, колбу нагревают на водяной бане до 60°С, после полного растворения бензидина добавляют 5,45 г ацетата натрия, охлаждают и доводят дистиллированной водой до метки; 3%-ный раствор пероксида водорода.

Техника определения. Для определения активности пероксидазы в ферментных препаратах или других объектах следует брать такое разведение растворов, чтобы изменение окраски происходило за 20—50 с.

76

В 2 кварцевые кюветы (2 см) приливают по 2 см3 ферментной вытяжки или центрифугата, 2 см3 бензидина, 2 см3 воды. Измерение оптической плотности смеси проводят на фотоэлектроколориметре со светофильтром, имеющим максимум светопропускания при Л, = 656 нм. Вначале устанавливают нулевую точку, затем правым барабаном отводят стрелку гальванометра в крайнее правое положение (? = 0,125 или 0,250). В левую кювету наливают 2 см3 воды, а в правую (опытную) 2 см3 пероксида водорода из пипетки с широким отверстием. С внесением первой капли включают секундомер. После вливания раствора пероксида водорода стрелка гальванометра начинает двигаться от края шкалы к нулевому делению. Секундомер останавливают, когда стрелка достигнет нулевого деления.

По найденной скорости реакции вычисляют активность фермента ПА (в ед./г): ПА = ?абв/(ct), где ? — экстинкция (? = 0,125); а —отношение количества жидкости, взятой для приготовления вытяжки (в см3), к массе культуры (в г); б —степень дополнительного разведения вытяжки (при необходимости); е —степень постоянного разведения вытяжки в реакционной смеси (в кювете); с — толщина слоя (2 см); t — время, с.

Определение активности каталазы

Сущность метода состоит в разрушении пероксида водорода каталазой на кислород .и воду (2Н202 = 2Н20 + + 02) и последующем газометрическом определении активности фермента, заключающемся в улавливании и измерении объема выделившегося кислорода после прибавления к водному экстракту каталазы пероксида водорода.

Активность каталазы выражают в кубических сантиметрах кислорода, которые выделяются ферментом, содержащимся в 1 г семян, за 1, 3 или 6 мин.

Необходимые реактивы. Пероксид водорода концентрацией не ниже 3% (за 10—12 ч до употребления этот Раствор нейтрализуют, прибавляя около 1 г СаС03 на '00 см3 раствора, и хорошо перемешивают); 5%-ный Раствор серной кислоты.

Техника определения. Определение ведется на приоре (рис. 11), который состоит из двух параллельно

77

к

укрепленных на штатное бюреток на 50 или 100 ем* диаметром 10—12 мм, соединенных в суженной части резиновыми трубочками с трехконцевой «гребенкой» Третий конец «гребенки» соединен резиновой трубкой со стеклянной грушей. Таким образом, получается система сообщающихся сосудов.

/ — сосуд для выполнения реакции со стаканчиком для перокси-да водорода: 2 ~ измерительная трубка; 3 — «груша» с раствором серной кислоты; 4 — трубка для облегчения установки уровня

Бюретка с отчетливыми делениями служит для измер

страница 28
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
прокат музыкального оборудования москва
cr 1-9
линзы на пол года цена
http://www.kinash.ru/etrade/goods/4402/city/Volgograd.html

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(15.12.2017)