химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

0,1 и. раствора йода и сразу же 60 см3 0,1 н. раствора NaOH или КОН. Щелочь приливают по каплям при перемешивании. Затем колбу накрывают часовым стеклом и оставляют на 15 мин в защищенном от света месте. Через 15 мин вводят 2 см3 серной кислоты (1:4) и титруют выделившийся йод 0,1 и. раствором тиосульфата натрия в присутствии индикатора— раствора крахмала.

Одновременно с основным опытом ставится контрольный, в котором к 10 см3 1%-ного раствора мальтозы добавляют сначала 2 см3 1 н. раствора НС1, а затем ферментный раствор. По разности между количеством 0,1 н. раствора тиосульфата натрия, израсходованного

72 на титрование контрольного я основного опыта, определяют количество гидролнзованной мальтозы. Титрование контрольных опытов проводят в течение 1 ч.

Расхождение между результатами титрования контрольного и основного опытов должно составлять не менее 0,5 и не более 4,4 см3 0,1 н. раствора Na2S203, что соответствует гидролизу мальтозы в пределах 8—75%.

Мальтазную активность МС (в ед./г или ед./см3) ферментных препаратов определяют по формуле МС = = е-5Р/(<п1000), где е — величина активности, найденная по табл. 7 в соответствии с результатами гигроваТаблица 7

Количество 0.1 и.

раствора тиосульфата Na,

Количество 0,1 н, раствора тиосульфата Na, см3

Перевод количества 0,1 н. раствора тиосульфата натрия в единицы МС

Единицы МС (е)

Единицы МС (е)

Единицы МС (е\

сма

1,8 1,9 2,0

12,71

13,34

13,98

14,66

15,35

16,10

16,87

17,67

18,51

19,40

20,34

21,38

22,38

3,1

3,2

3,3

3,4

3,5

3,6

3,7

3,8

3,9

4,0

4,1

4,2

4,3

6,19 6,61 7,05 7,49 7,94 8,41 8,89 9,39 4,90 10,43 10,97 11,53 12,11

1,51 1,82 2,15 2,47 2,81 3,16 3,51 3,86 4,23 4,61 4,99 5,38 5.78

0,5 0,0

0,7 0,8 0,9 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5 1,6 1.7

Количество 0,1 н. раствора тиосульфата Na, смэ

За единицу активности глюкозоизомеразы принимается такое количество фермента, которое обеспечивает превращение 1 ммоля ?)-глюкозы в D-фруктозу за 1 ч при температуре 70°С п рН реакционной смеси 7,5.

Необходимые реактивы. Смесь для проведения изомеризации — 2,5 см3 0,2М фосфатного буфера с рН 7,0, 1 см3 1,0 М раствора /Л^глюкозы, 0,5 см3 0,1 М раствора MgS04-7Н20; 1,5%-ный раствор хлорида цистеина; 0,12%-ный раствор карбазола в спирте; H2S04 (190см:| дистиллированной воды и 450 см3 концентрированной H2S04); 0,5 М раствор НС1.

Техника определения. В пробирку вносят последовательно смесь для изомеризации и ферментный раствор (его объем не должен превышать 6 см3). Общий объем должен быть равен 10 см3. Если ферментного раствора вносят меньше S см3, то недостающее количество заменяют дистиллированной водой.

После внесения ферментного раствора содержимое пробирки тщательно перемешивают и сразу же отбирают 2 см3, которые переносят в пробирку с 2 см3 0,5М раствора НС1. Данная проба является контрольной.

Оставшееся количество смеси (8 см3) инкубируют в термостате при 70 °С в течение 60 мин (опытная проба).

Образцы контрольной и опытной проб разводят водой с таким расчетом, чтобы содержание Сахаров в них в пересчете на фруктозу составляло от 10 до 60 мкг/см3, и определяют в обеих пробах содержание фруктозы цк-стеин-карбазольным методом. Для этого к 1 см3 исследуемого разведенного образца приливают 0,2 см3 раствора хлорида цистеина, 6 см3 H2S04 и 0,2 см3 раствора карбазола.

Содержимое пробирки тщательно перемешивают и помещают в водяную баню с температурой 40 °С на 30 мин. Ровно через 30 мин пробирку помещают в ледяную баню (г = 0°С).

Измерение оптической плотности исследуемого образца проводят при Х=560 нм против контрольного образца в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. Зная показания оптической плотности, по калибровочной кривой находят содержание фруктозы в растворе.

74

Определение активности липазы ,(ЛС) (модифицированный метод Ота, Ямада)

За единицу ферментативной активности липазы принимают такое количество фермента, которое освобождает 1 мкмоль олеиновой кислоты из 40%-ной эмульсии оливкового масла при рН 7,0 и температуре 37°С в течение 1 ч.

Метод основан на определении путем титрования щелочью жирных кислот, образовавшихся под действием липазы при использовании в качестве субстрата оливкового масла.

Необходимые реактивы. Раствор оливкового масла (субстрат); 2%-ный раствор поливинилового спирта; 1 н, раствор НС1; 0,05 н. раствор NaOH; фосфатно-цит-ратный буфер с рН 7,0; 1%-ный раствор фенолфталеина; 90%-ный раствор спирта; 1%-ный раствор фермента.

Приготовление субстрата. 100 см3 оливкового масла смешивают со 150 см3 2%-ного раствора поливинилового спирта в эмульгаторе. Полученную эмульсию выдерживают на льду в течение 60 мин. Если расслаивания не наблюдается, субстрат пригоден к использованию. Если замечено расслаивание, перемешивание необходимо повторить.

Приготовление раствора поливинилового спирта. 20 г

спирта помещают в мерную колбу на 1 дм3 и добавляют 800 см3 дистиллированной воды. Суспензию выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре,

страница 27
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
участки под дом в лесном цены условия
аренда экранов в москве
mxf 461.20-5
ручки для мебели с кисточками

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)