химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

птической плотности должна лежать в рабочей зоне градуировочной кривой, т. е. в пределах оптической плотности, соответствующей количеству глюкозы от 10 до 150 мкг.

Если при измерении интенсивности окраски исследуемой пробы полученные значения не укладываются в градуировочную кривую, опыт повторяют с меньшим количеством исследуемого ферментного препарата.

По полученным значениям экстинкцкй исследуемой пробы находят количество глюкозы, образовавшейся в результате действия фермента.

Глюкоамилазную активность ГлА (в ед./г или ед./см3) определяют по формуле ГлА = а/ (&•180-10), где а ~ количество глюкозы, образовавшейся в 1 см3 гидролизата за счет действия фермента, мкг; Ь — количество фермента в 1 см3 гидролизата, г или см3; 180 — молекулярная масса глюкозы (пересчет микрограммов в микромоли); 10 — время гидролиза, мин.

Пример. 100 мг препарата растворили в .колбе вместимостью 100 см3 и довели объем до метки диетилдироваииой водой. Затем 1э см3 .приготовленного раствора внесли в мерную колбу вместимостью ]00 см3 я довели объем до метки дистиллированной водой, па определение взяли 5 см3 исследуемого раствора; объем реакционной смеси 15 см3. Определяем количество фермента в гидро-л"зате в соответствии с разведением: 0,1 ? 15-5»0/(1Ш- 1СЮ-;115) = = 0,00005 г.

В результате колориметрирования этого раствора получена ве• ичика O=0d173. По градуировочной кривой эта величина соответ-твует 87 мкг глюкоаы. Подставляя ее в формулу, определяем знание глюкоамилазной активности (в ед./г): ГлА=8Г7/(0|,ОШ5-Ш• W) = 9157^

66

3* 67

Определение осахаривающей активности (ОС)

Метод основан на гидролизе растворимого крахмала в пределах 25% гликозидных связей исследуемым ферментом с последующим йодометрическим определением количества образовавшихся Сахаров.

Осахаривающая активность ОС характеризует способность амилолитических ферментов катализировать осахаривание крахмала до восстанавливающих Сахаров— мальтозы или мальтозы в смеси с глюкозой.

За единицу осахаривающей активности принято такое количество фермента, которое в строго определенных условиях за 1 мин при 30°С катализирует расщепление до восстанавливающих Сахаров 1 мкэкв гликозидных связей. ОС выражается в ед./г.

Необходимые реактивы. 1%-ный раствор крахмала (субстрат); ацетатный буферный раствор с рН 4,7; 0,1 н. раствор йода —25 г йодида калия растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм3 в минимальном количестве дистиллированной воды, туда же вносят 12,7 г йода и доводят дистиллированной водой до метки; 0,1 и. раствор тиосульфата натрия (гипосульфита) — 25 г Na2S203 растворяют в мерной колбе вместимостью 1 дм3 в дистиллированной воде, не содержащей С02, хранят в склянке из темного стекла с сифоном и бюреткой с хлоркальциевой трубкой, заполненной натронной известью, титр устанавливают обычным методом по дихромату калия; раствор серной кислоты (1 : 4) — к четырем объемам дистиллированной воды приливают один объем концентрированной H2S04; 0,1 н. раствор NaOH или КОН —4 г гидроксида натрия или 5,6 г гидроксида калия растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3, объем доводят до метки; 1 н. раствор НС1 — 82,2 см3 концентрированной соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1 дм3; фосфатный буферный раствор с рН 6,0 —готовят смешиванием девяти объемов раствора А (9,077 г КН2Р04 растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3) и одного объема раствора Б (11,876 г Na2HP04 растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3).

68

Техника определения. При анализе культур и препаратов из грибов, например Aspergillus oryzae, в эрлен-мейеровские колбы вместимостью 50 см3 вводят пипеткой по 20 см3 1%-ного раствора крахмала и погружают их в водяную баню с температурой 30±0,2°С. Через 10 мин в колбы добавляют от 1 до 10 см3 ферментного раствора и тщательно перемешивают. Общий объем реакционной омеси должен быть 30 см3. Если на определение берут меньше 10 см3 раствора фермента, то недостающий объем дополняют дистиллированной водой, которую вводят непосредственно перед добавлением ферментного раствора.

Через 10 мин после добавления ферментного раствора действие фермента приостанавливают добавлением 2 см3 1 н. раствора НС1.

Для определения образовавшейся мальтозы содержимое колбы после осахаривания количественно переносят, смывая дистиллированной водой, в коническую колбу вместимостью 300—400 см3, туда же добавляют пипеткой 20 см3 0,1 и. раствора йода и 60 см3 0,1 н. раствора NaOH или КОН. Щелочь приливают по каплям при перемешивании, затем колбу накрывают часовым стеклом и оставляют на 15 мин в защищенном от света месте. Через 15 мин вводят 2 см3 H2S04 (1:4) и титруют выделившийся йод 0,1 н. раствором тиосульфата натрия.

Одновременно ставят контрольный опыт в конической колбе с теми же количествами всех реагентов, только ферментный раствор вводят после добавления 2 см3 1 н. раствора НС1 (без выдержки в водяной бане).

Расхождение между результатом титрования

страница 25
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
небольшая вмятина на крыле стоимость
шкафы для отдела кадров метал
kaleo концерт в москве 25.11.17
danfoss living eco цена

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(17.10.2017)