химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

2 см3, т. е. получена такая последовательность разведений: 5 г-* -?-100 см»-*2Ю ем3->-5в с.ч3->-2 см3.

Для гидролиза 0,25 г крахмала (25 см3 1%-ного раствора кра*' мала) ферментным раствором последнего разведения (2 см3) потРе'

64

бодалось 12 мин. Тогда АС воздушно-сухой культуры составит 0,25-60-50-100-16(12-2-20-5) =31,25 ед./г. '

При пересчете ферментативной активности на абсолютно сухое вещество ферментного препарата следует учитывать влажности и производить пересчет по формуле: АСсв = АС-100(100—W), где fl7—влажность культуры или препарата, %.

Определение глюкоамилазной активности (ГлА)

Метод основан на количественном определении глюкозы, образующейся при гидролизе растворимого крахмала ферментом глюкоамилазой. Глюкоамилазная активность ГлА характеризует способность ферментного препарата катализировать расщепление растворимого крахмала до глюкозы и выражается числом единиц активности в 1 г препарата.

За единицу глюкоамилазной активности принято такое количество фермента, которое, гидролизуя растворимый крахмал при температуре 30°С и рН 4,7 в течение 1 мин, освобождает 1 мкмоль глюкозы.

Фермент глюкозооксидаза катализирует окисление d-глюкозы кислородом воздуха до глюконовой кислоты. Вторым продуктом реакции является пероксид водорода. Оба конечных продукта образуются в количествах, эквимолярных окисленной глюкозе. Пероксид водорода под влиянием фермента пероксидазы окисляет гексациа-но-(П)-феррат калия (калий железистосинеродистый, желтая кровяная соль), который переходит в ферроциа-нид калия, окрашенный в лимонно-желтый цвет. Интенсивность окраски .пропорциональна количеству образующейся глюкозы.

Необходимые реактивы. 1%-ный раствор крахмала (субстрат, употребляемый для анализа грибных препаратов, например Asp. niger, Asp. awamori, должен иметь рН 4,7, что достигается добавлением ацетатного буфера с РН 4,7; для анализа дрожжевых препаратов, например Endomycopsis sp. 20-9, рН субстрата должен быть равен 5,6, что достигается добавлением фосфатного буфера с рН 5,6); 1 М фосфатный буферный раствор с рН 7>5 — смешивают равные объемы KH2POi (136 г безводного КН2Р04 в 1 дм3 дистиллированной воды) и КОН (&6 г КОН в 1 дм3 дистиллированной воды); насыщения бензойная кислота — 2,7 г бензойной кислоты рас3 ЗаК, 79j g5

творяют в дистиллированной воде в мерной колбе на

1 дм3; 0,1%-ный раствор глюкозы в бензойной кислоте; рабочий раствор ферментных препаратов (раствор С) — готовят смешиванием равных объемов раствора А (0,1 г гексациано-(П)-феррата калия растворяют в воле в мерной колбе вместимостью 100 см3; раствор готовят непосредственно перед определением) и Б (5,6 мг глюко-зооксидазы, соответствующих 500—600 ед./г ферментативной активности при активности глюкозооксидазы 10000 ед./г, растворяют в 1 М фосфатном буфере с рН 7,5 в мерной колбе на 50 см3, затем добавляют

2 мг пероксидазы. Объем доводят до метки 1 М. фосфатным буфером). Полученный раствор хранят в темной склянке в холодильнике в течение 2—3 сут.

Техника определения. 5 см3 исследуемого раствора ферментного препарата, нагретого до 30°С, приливают к 10 см3 1%-ного раствора крахмала, нагретого до этой же температуры, и инкубируют 10 мин в ультратермостате при 30°С. Точно через 10 мин отбирают 1 см3 гид-ролизата, переносят его в маленькую пробирку, помещенную в кипящую водяную баню, инактивируют фермент в течение 2 мин и затем охлаждают холодной водой. Для определения содержания глюкозы в каждую пробирку с охлажденным гидролизатом вносят по 3 см3 рабочего раствора С, перемешивают и оставляют на 45 мин при комнатной температуре.

Одновременно с исследуемой пробой готовят контрольную. Для этого 5 см3 раствора ферментного препарата кипятят на водяной бане в течение 10 мин (для инактивации фермента), затем раствор охлаждают и до бавляют 10 см3 1%-ного раствора крахмала.

Все последующие операции с контрольными пробами проводят так же, как с опытными.

Кроме указанной контрольной пробы на инактивиро-ванный фермент ставят контрольную пробу на рабочий раствор С. Для этого к 3 см3 рабочего раствора приливают 1 см3 дистиллированной воды.

Интенсивность окраски полученных растворов определяют на фотоэлектроколориметрах ФЭК-56, пользуясь светофильтром с Я = 400 нм, и ФЭК-60 —при Я = 390 и 418 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Для построения градуировочной кривой используют стандартные растворы глюкозы, содержащие в 1 см3 50, 100 и 150 мкг глюкозы. К 1 см3 раствора глюкозы добавляют 3 см3 рабочего раствора С. Окраска развивается в течение 45 мин, после чего измеряют оптическую плотность растворов на фотоэлектроколориметре. По полученным значениям строят градуировочную кривую, откладывая по оси абсцисс количество глюкозы, по оси . ординат — соответствующую оптическую плотность. Рабочая зона градуировочной кривой лежит в области 10—150 мкг.

Если контрольные пробы на инактивированный фермент имеют заметную окраску, исследуемый раствор ко-лориметрируют, взяв в качестве раствора сравнения рабочий раствор. Величина о

страница 24
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
подставка под телевизор своими руками
заказать форму для волейбола
рамка для автомобильного номера со шторкой
дл в наружной рекламе

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.04.2017)