химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ределяют минимальным количеством времени, за которое можно визуально уловить изменение окраски йода. Допускают, что скорость ферментативной реакции прямо пропорциональна количеству примененного фермента и остается постоянной на протяжении от 5 мин до 1 ч, т. е. реакция подчиняется закону реакции нулевого порядка. Кроме того, установлено влияние величины рН и химической природы буфера на величину АС. С ацетатным буфером (рН 4,7) величина АС у грибных препаратов в среднем в 1,5 раза выше, чем при определении с фосфатным буфером (рН 6,0). Поэтому при определении АС грибных культур рекомендуется брать ацетатный буфер.

Недостатком метода является нечеткость визуального определения конца реакции.

Необходимые реактивы. Ацетатный буфер с рН 4,' для ферментов грибного происхождения; фосфатный бу-62 фер с рН 6,0 для ферментов бактериального происхождения; 1%-ный раствор крахмала (раствор крахмала, употребляемый для анализа грибных препаратов, дол-жен иметь рН 4,7, для анализа бактериальных препаратов— 6,0); растворы йода — для приготовления основного раствора йода в тарированный стаканчик с притертой крышкой отвешивают 4,4 г йодида калия, 1,4 г металлического йода и добавляют около 2,0 см3 дистиллированной воды. Стаканчик закрывают крышкой, содержимое перемешивают и по растворении йода переводят раствор в мерную колбу на 100 см3 с притертой пробкой. Доводят объем дистиллированной водой до метки. Содержимое колбы хранят в темном прохладном месте. Основным раствором йода можно пользоваться в течение 30 дней со дня его приготовления. Рабочий раствор йода готовят из основного раствора: для этого 20 см3 основного раствора йода наливают в мерную колбу вместимостью 100 см3, добавляют 4,4 г KJ и доводят объем раствора до 100 см3. Рабочий раствор йода может употребляться в течение 6 дней после его приготовления.

Техника определения. Для определения АС важно строго соблюдать температурные условия реакции. Для этого предварительно все растворы — субстрат (1%-ный раствор крахмала), раствор фермента и дистиллированная вода — должны быть нагреты до 30°С.

25 см3 субстрата помещают в широкую пробирку, в которую вставлена стеклянная палочка. 30 см3 вытяжки и 30 см3 воды наливают в отдельные пробирки, помещают в ультратермостат и выдерживают при температуре 30°С в течение 10 мин.

Затем в широкую пробирку к раствору крахмала, не вынимая пробирок из термостата, с помощью пипеток Добавляют от 1 до 25 см3 исходного ферментного раствора и соответствующее количество воды так, чтобы общий объем реакционной смеси был 50 см3. Если ферментная вытяжка малоактивна, то можно внести только ее в количестве 25 см3, а воду вообще не добавлять.

Содержимое в пробирке перемешивают палочкой и отмечают время по секундомеру, когда была добавлена вытяжка к раствору крахмала. Каждые 60 с из пробирки, не вынимая ее из термостата, отбирают палочкой каплю пробы. Каплю помещают на белую фарфоро-Ую пластину, соединяют эту каплю с каплей рабочего

63 раствора йода и наблюдают окраску. Реакция расщеп-ления крахмала считается оконченной, когда йод пере, стает давать изменение окраски при соединении с кап-лей испытуемого раствора в течение первых 10 с. Изме-нение окраски йода отчетливо видно на границе соприкосновения двух капель — йода и реакционной смеси.'

Время, за которое происходит расщепление крахмала до продуктов, не окрашивающихся йодом, должно быть .в пределах 10—20 мин.

Если время гидролиза крахмала менее 10 мин, тс определение повторяют, беря на гидролиз меньше вытяжки и больше воды. Если гидролиз крахмала не заканчивается в течение 20 мин, то анализ также повторяют, беря на определение больше ферментной ВЫТЯЖКЕ и меньше воды. Количество ферментной вытяжки, которое необходимо брать на повторный анализ, вычисляют с учетом полученного времени гидролиза.

Если ферментная вытяжка имеет малую или слишком высокую активность и количество ферментного раствора от 1 до 25 см3 не обеспечивает длительности гидролиза крахмала в течение 10—20 мин, для анализа берут не 25 см3 раствора крахмала, а большее или меньшее его количество, например 10 или 40 см3, внося соответствующую поправку в расчетную формулу (соответственно 0,1 или 0,4 вместо обычных 0,25 г).

Величину амилолитической активности АС (в ед./г) рассчитывают по формуле ЛС = 0,25-60/(лт), где 0,25-количество крахмала, которое находится в 25 см3 ere 1%-ного раствора, г; 60 —пересчет на 1 ч; п — количество фермента, участвующего в реакции, г или см3 (эта величина определяется с учетом концентрации исходной вытяжки и последующего разведения); т—время, за которое произошло расщепление крахмала до неокрашн-ваемых йодом продуктов, мин.

Пример. Для анализа приготовлена! ферментная вытяжка к3 воздушно-сухой культуры гриба. Исходный раствор приготовлю из расчета 5 г культуры на 100 см3 забуференной воды;. Известие что данная культура очень активна, поэтому сделано дополнительное разведение исходного раствора: 20 см5 доведено в мерной ко.'' бе до 50 см3 дистиллированной водой и оттуда на анализ взя'5

страница 23
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
показать табличку с номером 35 всотой 100мм
оне степ раствор
видеосвидетель 3403 fhd отзывы
мюзикл маленькое сердце

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)