химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

препарата) и разбавляют его водой до 50 см3 (при испытании препарата с активностью от 20 до 700 ед./г) и до 200 см3 (при активности 700 ед./г и выше).

Количество основного раствора препарата, которое необходимо взять для приготовления рабочего раствора фермента, находят по табл. 3.

Таблица 3

Амплолнтическап

активность препарата, ед./г (предполагаемая)

Зависимость количества основного раствора на разбав \ение от активности препарата

Количество препарата в 5 см; рабочего раствора,

Общин объем разбавленного раствора, сма

50 50 50 50 200 200 200 200

50 20 10 5 10 5 2 I

20—80 81-150 151—300 301-700 701 — 1200 1201—2500 2501—5000 Свыше 5000

5,0

2,0

1,0

0,5

0,25

0,125

0,05

0,025

Количество основного раствора, необходимое для вторичного разбавления, см3

татного буфера с рН 4,7. Смесь выдерживают в тече ние 1 ч в термостате при температуре 30°С, периоду ски перемешивая, и затем фильтруют. Фильтрат исполь. зуют в качестве основного раствора.

Рабочий раствор культуры гриба готовят из осноь ного раствора, В. зависимости от активности исследуе мой культуры гриба рабочий раствор разбавляют дц стиллированной водой до 100 см3 (при испытании куль туры гриба с активностью от 5 до 100 ед./г) и до 200 см (при активности 100 ед./г и выше).

Количество основного раствора культуры гриба, ко. торое необходимо взять для приготовления рабочей раствора, находят по табл. 4.

Таблица 4

Количество культуры 5 смя рабочего раствора„ мг

Количество основного раствора, необходимое для вторичного разбавления, см3

Общий объем разбавлетиго раствора, см3

Зависимость количества основного раствора на разбавление от активности культуры

5—15 16—50 51 — 100 101 — 150 151—300

37,5

10,0 2,5 1,25 0,625

15 4 1 1

0,

100 100 100 200 200

Амилолитическая активность культуры гриба, ед./г (предполагаемая)

растворы приобретают следующую окраску: контрольный— синюю, опытный — фиолетовую различной интенсивности в зависимости от количества непрогидролизо-ванного крахмала.

Непосредственно после смешивания растворов определяют их оптическую плотность на фотоэлектроколори-метре, используя светофильтр с максимумом светопро-пускания при Х = 656 нм, пользуясь кюветами с толщиной поглощающего свет слоя 1 см. Контрольным раствором при колориметрировании исследуемых растворов является дистиллированная вода.

Оптическая плотность контрольного раствора Ј>I соответствует количеству исходного крахмала субстрата. Оптическая плотность опытного раствора Юг соответствует количеству крахмала, оставшегося после действия фермента. Разница между показателями оптических плотностей растворов соответствует гидролизованному количеству крахмала субстрата.

Количество гидролизованного крахмала С (в г) определяют по формуле С = 0,1 (Di—D2) : D,, где 0,1 —количество крахмала, взятое для испытания в качестве субстрата, г.

Если количество гидролизованного крахмала меньше 0,02 или больше 0,07 г, то испытание повторяют. Для этого при приготовлении рабочего раствора фермента берут большее или меньшее количество исходного раствора для разбавления.

Если в результате ферментативной реакции количество превращенного крахмала находится в указанных пределах, полученные данные используют для расчета амялолитиче'ской активности.

Амилолитическую активность АС (в ед./г) препаратов бактериального происхождения определяют по формуле АС= (5,885С + 0,001671)1000 : п, а амилолитическую активность ACt (в ед./г) препаратов грибного происхождения — по формуле ACi=(7,264C—0,03766) 100 :

где 5,885; 0,001671; 7,264; 0,03766 — коэффициенты Расчетного уравнения, полученные при математической обработке экспериментальных данных зависимости количества гидролизованного крахмала от количества фермента, взятого для испытания. В коэффициенты введен множитель для пересчета на 1 ч действия фермента; С— °личество прогидролизованного крахмала, г; 100,

61

1000 — коэффициенты пересчета миллиграммов в г рал. мы; п — количество ферментного препарата, взятое дд; испытания, мг.

КАПЕЛЬНЫЙ МЕТОД

(ПО КЛИМОВСКОМУ И РОДЗЕВИЧ)

Амилолитическая активность, обусловленная в основ ном наличием в препарате а-амилазы, характеризует способность фермента катализировать гидролиз крахма ла до неокрашиваемых йодом продуктов. При нали чии в препарате а-амилазы и глюкоамилазы этим мето дом определяется суммарное действие всех амилолити ческих ферментов.

За единицу амилолитической активности в этом методе принято такое количество фермента, которое ката лизирует расщепление 1 г растворимого крахмала до продуктов, неокрашиваемых йодом, за 1 ч при темпе ратуре 30°С в строго определенных условиях. Амилоли тическую активность АС выражают числом указанных единиц в 1 г препарата, культуры или 1 см3 раствора АС показывает, сколько граммов крахмала может быт гидролизовано до неокрашиваемых йодом продуктов li препарата, культуры или 1 см3 раствора за 1 ч в уело виях определения. Конец реакции контролируют визу ально по йодной пробе.

Чувствительность метода оп

страница 22
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
KNS.ru - гипермаркет электроники предлагает игровой пк в кредит - у нас всегда дешево!
самодельная шашечку для такси
аренда на три дня вип авто с водителем в москве
курсы дизайн интерьера и autocad/archicad

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.04.2017)