химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ой воды и тщательно перемешивают. Зати 0,5 см3 раствора переносят в коническую колбу, в кото рую предварительно налито 50 см3 раствора йода. Полу ченный окрашенный раствор колориметрируют на фоте электроколориметре при длине волны Х = 656нм проти: дистиллированной воды в кювете с толщиной поглощаю щего свет слоя 1 см. Оптическая плотность должна быи не менее 0,690.

Техника определения. 10 см3 1%-ного раствора пей товой кислоты вносят в колбы вместимостью 100 см3 помещают их в термостат с температурой 30±0,2°С Через 10 мин в колбы добавляют Необходимое колнче ство дистиллированной воды и от 1 до 5 см3 ферментно го раствора (в зависимости от активности ферментноп препарата). Общий объем реакционной смеси должен быть 15 см3. Растворы тщательно перемешивают.

Через определенное время (10, 20, 30 или 60 мин t зависимости от ферментативной активности) в эти ж колбы добавляют по 1,8 см3 1 М раствора карбоната наг рия и по 10 см3 0,1 н. раствора йода. Все тщательно пе ремешивают, закрывают стеклянными пробками и остав ляют стоять точно 20 мин в защищенном от света месте Затем вносят в колбы по 2 см3 2М раствора H2S04 < оттитровывают избыток йода 0,05 н. раствором тиосуль' фата натрия в присутствии крахмала.

Одновременно ставят контрольный опыт с таким * количеством всех реагентов, только ферментный раство; вводят после добавления карбоната натрия непосредст венно перед прибавлением раствора йода.

При испытании ферментных препаратов, активное^ которых неизвестна, следует несколько изменить технИ ку проведения опыта: брать не 10, а 50 см3 раствор' субстрата и от 1 до 25 см3 ферментного раствора (о^ 54 щий объем реакционной смеси 75 см3). Из этой реакционной смеси каждые 5—10 мин отбирают по 15 см3 в колбы куда предварительно налито по 1,8 см3 1 М раствора карбоната натрия, далее поступают, как описано раН66>

Полигалактуроиазную активность ПгС (в ед./г), измеренную по нарастанию количества альдегидных групп, вычисляют по формуле ПгС = 51,3 a/(tm), где 51,3 — число альдегидных групп, соответствующих 1 см3 0,1 н. раствора йода, мкэкв; а — количество 0,1 н. раствора йода, израсходованное на окисление образовавшихся при пектолизе альдегидных групп (находят по разности титрований раствором тиосульфата натрия опытной и контрольной проб), см3; t — время гидролиза пектина, мин; т—количество препарата в пробе, взятое на титрование, г.

Для расчета ПгС могут быть использованы данные нарастания количества альдегидных групп вплоть до 20%-ного гидролиза пектовой кислоты.

Определение пектинэстеразной активности (ПэС)

Метод основан на гидролизе раствора пектина исследуемым ферментным препаратом с последующим количественным (титрометрнческнм) определением освободившихся в результате гидролиза карбоксильных групп.

Пектинэстеразная активность характеризует способность фермента катализировать гидролиз сложноэфир-ных связей в молекуле пектина с образованием метилового спирта и свободных карбоксильных групп.

За единицу активности пектинэстеразы принято такое количество фермента, которое катализирует гидролиз 1 мкэкв сложноэфирных связей в молекуле пектина за 1 мин при 30°С. Пектинэстеразную активность выражают числом единиц фермента в I г (или 1 см3) исследуемого препарата.

Определяемая величина пектинэстеразной активности находится в непосредственной зависимости от степени и этерификации пектина; сравнимые результаты при работе с различными субстратами можно получить лишь ПРИ пересчете полученных данных на субстрат со 100%-нои степенью метоксилирования. В принятых условиях

55 определения количество расщепленных сложноэфирнц связей прямо пропорционально количеству фермента пределах 20%-ного гидролиза.

Необходимые реактивы. 1%-ный раствор высоко\н токсилированного пектина (субстрат); инактивировац ный ферментный раствор; 0,1 н. раствор гидроксид< натрия.

Приготовление 1%-ного раствора высокометоксили рованного пектина (субстрат). Навеску пектина, взятук с таким расчетом, чтобы в 100 см3 раствора был 1 г пек тина, медленно всыпают при тщательном перемешпва. нии стеклянной палочкой в стакан с дистиллированно! водой (70 см3 на 1 г пектина) и оставляют на 2 ч npj комнатной температуре для набухания и растворения после чего помещают на ночь в холодильник (темпера-тура от 4 до 6°С). На следующий день раствор нагревают до 20°С, количественно переносят в мерную колб; соответствующей вместимости, доводят дистиллированной водой до метки, тщательно перемешивают и фильт руют через два слоя марли с ватой на воронке Бюхнера. Раствором можно пользоваться двое суток при условии хранения его в холодильнике. Используемый пектин должен иметь степень метоксилирования не менее 80%, Приготовление инактивированного ферментного раствора. Для инактивации фермента, применяемого в контрольном опыте, 25 см3 основного ферментного раствора помещают в колбу вместимостью 50 см3, закрывают пробкой с воздушным холодильником и выдерживают в кипящей бане 1 ч.

Техника определения. В четыре стакана вместимостью по 50 см3 наливают по 20 см3 1%-ного р

страница 20
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
курсы полиграфическая верстка в зеленограде
вита пос гель купить
декантер цена
курсы на швею в южном бутово

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(06.12.2016)