химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ллического тимолфталеина растворяют в 96%-ном спирте-ректификате в мерной колбе на 100 см3 и после растворения доводят до метки, закрывают пробкой и хранят в темном месте; 0,1 н. раствор гидроксида натрия — 4 г кристаллического NaOH растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды; 96%-ный этиловый спирт.

Техника определения. К 10 см3 5%-ного раствора желатина с рН 7,3—7,5 приливают 2 см3 испытуемого ферментного раствора и сразу же отбирают 1 см3 реакционной смеси в коническую колбу на 50—100 см3, куда предварительно налито 20 см3 96%-ного этилового спирта и 0,2 см3 1%-ного раствора тимолфталеина. Пробу тут же титруют 0,1 н. раствором NaOH. После появления голубой окраски в растворе прибавляют еще 4 капли щелочи и на этом титрование заканчивают. Титрование проводят из микробюретки с ценой деления 0,02 см3.

Оставшуюся смесь желатина с ферментным раствором помещают в термостат с температурой 40°С для гидролиза. Через 3 ч 1 см3 реакционной смеси отбирают во вторую коническую колбочку на 50—100 см3, куда предварительно налито 20 см3 96%-ного этилового спирта и 0,2 см3 1%-ного раствора тимолфталеина, и титруют аналогично контролю.

Расчет протеолитической активности ПС ведут по формуле ПС=Л/(гР), где А — количество аминного азота, накопленное за время опыта в реакционной смеси, мг; t—время протеолиза, ч; Р—коэффициент, учитывающий разведение и пересчет на 1 г препарата или 1 см3 жидкого ферментного раствора.

Величина А рассчитывается по формуле Л = = (а—ак) 1,4 К, где а— количество 0,1 н. раствора NaOH, пошедшее на титрование 1 см3 опытной пробы, см3; а„— то же, для контрольной пробы; 1,4 — коэффициент пересчета количества 0,1 н. раствора щелочи в миллиграммы азота аминокислот и полипептидов; К—поправка к титру щелочи.

ПРИМЕР. На титрование 1 ом3 опытной пробы пошло 1,0& см3 0,1 н. раствора NaOH, А на титрование 1 см3 контрольной пробы —

42

0 &8 см3. Время фермеитоляза было 3 ч. Поправка к титру NaOH #=1,06. Следовательно, Л= (1,08—0,Щ 1,4-1,06=0,59 мг.

Исходная 10|%-мая вытяжка была приготовлена из сырой поверхностной культуры с влажностью 50%, фильтрат вытяжки из культуры в количестве 2 см3 был добавлен к 10 см3 5%-ного раствора желатина, из реакционной смеси на анализ отобрали 1 см3. Схема разведения имеет вид: lO-^-lOO-^-vilSr-t-.l.

Подсчитываем ПС: ПС=A/(tP) =0,59-12-100/(3-1 -2• 10) = ] 1,8 ед. на 1 г культуры.

Еоли требуется пересчитать протеолитичеокую активность на сухое вещество культуры, то расчет ведется по формуле ПСсв = = ПС.11ОЮ/(10О-Ц7) =11:1,8- 10Ю/(1О0—60) =i28,6 ед./г.

Если ведется определение активности в очищенном препарате, то составляется соответствующая схема разведения и делается аналогичный растет.

МЕТОД ЛЕЙЛЯН-ФОЛЬГАРДА В МОДИФИКАЦИИ

Метод основан на гидролизе ферментами щелочных растворов казеина и оттитровывании свободной соляной кислоты. Протеолитическая активность по этому методу выражается в количестве 0,1 н. раствора NaOH (в см3), пошедшего на титрование свободной соляной кислоты, не связанной казеином в результате воздействия 1 г или 1 см3 ферментного препарата на казеин в течение 1 ч при 37—40°С.

Необходимые реактивы. 0,2 н. раствор соляной кислоты— 16,4 см3 х. ч. концентрированной соляной кислоты плотностью 1,189 разбавляют дистиллированной водой до 1 дм3; 15%-ный раствор сульфата натрия—15 г соли растворяют при нагревании в 85 см3 дистиллированной воды; 0,1 н. раствор гидроксида натрия — 4,0 г NaOH растворяют в дистиллированной воде и объем доводят до 1 дм3; 1%-ный раствор крезолрота (индикатор); 5%-ный щелочной раствор казеина — 5 г казеина (сухого, измельченного) помещают в стакан, заливают небольшим количеством (30—40 см3) теплой воды и оставляют на 30 мин для набухания, затем стакан помещают в баню с температурой 60—70°С и при перемешивании добавляют небольшими порциями 5 см3 1 н. раствора NaOH, помешивая до тех пор, пока казеин полностью не растворится; растворенный казеин количественно переносят в мерную колбу на 100 см3, после охлаждения раствор доводят до метки дистиллированной водой. Казеином можно пользоваться 2—3 дня, если хранить его в холодильнике при температуре не выше

43

Техника определения. Раствор казеина перед определением нагревают до температуры 37°С. В две колбочки на 100 см3 наливают по 20 см3 5%-ного раствора казеина. Затем в опытную колбочку добавляют 10 см3 исследуемого раствора и колбу помещают в термостат с температурой 37°С на 1 ч. В контрольную колбочку также добавляют 10 см3 исследуемого раствора и быстро осаждают казеин 0,2н. раствором НС1 и 10 см3 15%-но-го раствора Na2S04. Выпавший осадок отфильтровывают и отбрасывают. Через 1 ч проводят точно такое же осаждение и в опытной колбочке.

В чистые колбы отмеривают по 10 см3 фильтрата из опытной и контрольной колбочек, добавляют по 2 капли крезолрота и титруют 0,1 и. раствором NaOH до ярко-малинового окрашивания.

Величину протеолитической активности ПС (в ед./см3) находят по разнице количеств 0,1 н. раствора NaOH, пошедших на титрование опытной и контрольной пробы: ПС=(а—

страница 15
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
1 нф кирпич
Предлагаем приобрести в КНС 3д проектор купить - офис продаж в Москве, доставка заказов по всей России.
рабица купить кривой рог
купить билеты в театр кукол образцова

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(22.05.2017)