химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

еактива Фолина. Дают реакционной смеси постоять 20 мин. После реакции растворы приобретают голубую окраску, интенсивность которой определяют на фотоэлектроколориметре.

Одновременно готовят контрольную пробу, приливая

реактивы в обратной последовательности: к 2 см3 ферментного раствора того же разведения, как и в опыте,

добавляют 4 см3 ТХУ, выдерживают в ультратермостате при 30°С 10 мин, а затем вносят 2 см3 субстрата.

Через 20 мин раствор фильтруют, отбирают в сухую

пробирку 1 см3 фильтрата, при перемешивании вносят

5 см3 0,5 М раствора карбоната натрия и 1 см3 реактива Фолина. -I

Оптическую плотность опытного раствора определяют по отношению к контрольному на фотоэлектроколориметре при длине волны 656—670 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм.

Построение градуировочной кривой. Для расчета протеолитической активности необходимо построить градуи39

ровочную кривую по тирозину. Затем по градуировочной кривой вычислить тирознновый эквивалент ТЭ, т. е. ту оптическую плотность, которую бы дал 1 мкмоль тирозина в 1 см3 стандартного раствора. Этот эквивалент необходимо устанавливать для каждой новой партии реактива Фолина и каждого фотоэлектроколориметра.

Для построения градуировочной кривой готовят раствор тирозина концентрацией 10_3М. Для этого 181,19 мг чистого тирозина растворяют в 0,2 н. растворе соляной кислоты в мерной колбе вместимостью 1 дм3 (готовят 2 параллельные пробы). Из этого исходного раствора тирозина готовят дальнейшие разведения следующим образом:

раствора; с2 = 0,4

раствора; Сз = 0,8

раствора; с4 = 1,0

раствора; cs = 1,5

раствора; cs = 2,0

раствора; с- = 3,0

раствор 1 — в мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 1 см3 исходного раствора тирозина и доводят объем до метки 0,2 н. раствором соляной кислоты. Концентрация тирозина Ci при этом составляет 0,2-10~4М, или 0,02 мкмоль/см3;

раствор 2 — 2 см3 исходно

• Ю-4 М, или 0,04 мкмоль/см3;

раствор 3 — 4 см3 исходно

• 10-' М, яли 0,08 мкмоль/см3;

раствор 4 — 5 см3 исходно •10~4М, или 0,10 мкмоль/см3;

раствор 5—7,5 см3 исходно; •10_4М, или 0,15 мкмоль/см3;

раствор 6—10 см3 исходно!

• Ю-4 М, или 0,20 мкмоль/см3;

раствор 7—15 см3 исходно! ? 10-4М, или 0,30 мкмоль/см3.

Затем в пробирки вносят по 1 см3 раствора тирозина разной концентрации. Добавляют в них при постоянном помешивании по 5 см3 0,5М раствора карбоната натрия и 1 см3 рабочего раствора Фолина. Контрольный опыт готовят так же, но вместо раствора тирозина берут 1 см3 дистиллированной воды. Дают реакционной жидкости постоять 20 мин.

Интенсивность окраски опытного раствора определяют по сравнению с контрольным при длине световой волны 656—670 нм в кюветах с толщиной поглощающего свет слоя 10 мм. По средним данным, полученным из двух опытов, строят градуировочную кривую. На осп абсцисс откладывают количество тирозина С

(в мкмоль/см3), на оси ординат—соответствующие значения оптической плотности D.

Протеолитпческую активность ПС (в ед./г или ед./см3) вычисляют по формуле ПС = Д-4-1000/ (ТЭ-10 от), где D — оптическая плотность, измеренная на фотоэлек-троколориметре при толщине поглощающего свет слоя 10 мм; 4 —отношение объемов реакционной смеси и раствора фермента после добавления ТХУ; 1000 — коэффициент перевода полученных единиц на 1 г ферментного препарата; ТЭ— тирознновый эквивалент, определяемый по градуировочной кривой; 10 — время гидролиза субстрата, мин; от—количество ферментного препарата, взятого на протеолиз, мг на 1 см3 ферментного раствора.

МЕТОД ВИЛЬШТЕТТЕРА И ВАЛЬДШМИДТ-ЛЕИТЦА В МОДИФИКАЦИИ

Метод основан на определении свободных карбоксильных групп в спиртовых растворах аминокислот и полипептидов.

Активность (ПС) выражают количеством миллиграммов аминного азота, которое образуется при гидролизе определенного количества 5%-ного раствора желатина с рН 7,3—7,5 1 г препарата или 1 см3 ферментного раствора за 1 ч при температуре 40°С.

За единицу протеолитической активности принимают количество фермента, которое образует 1 мг аминного азота за 1 ч в принятых условиях опыта.

Необходимые реактивы. Фосфатный буферный раствор с рН 7,3—7,5; 5%-ный раствор желатина (субстрат)— 5 г желатина предварительно замачивают в стеклянном стаканчике в 15—20 см3 дистиллированной воды в течение 20—30 мин. Набухший белок заливают 20—25 см3 буферного раствора температурой 70—80°С и тщательно перемешивают стеклянной палочкой. Растворившуюся часть сливают в мерную колбу на 100 см3, к нерастворившейся части добавляют еще 20—25 см3 буферного раствора и снова переносят полученный раствор в эту же колбу. Так повторяют до полного растворения желатина. Охлажденный до 40°С раствор желатина доводят до метки буферным раствором такой же температуры. Готовый раствор желатина должен храниться

41

г

в холодильнике при температуре от 2 до 5°С и может быть использован для анализа в течение 2 сут. Перед анализом раствор желатина нагревают до 40°С на водяной бане; 1%-ный спиртовой раствор тимолфталеина — 1 г криста

страница 14
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
комоды из пластмассы интернет магазин
напечатать баннер + москва
стоимость операции по удалению полипов носа
сервисное обслуживание vrv блока

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(25.07.2017)