химический каталог




Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева, Ю.П.Грачев, М.С.Мосичев, Е.Г.Борисенко и др.

ится смешиванием равных объемов растворов А (0,1 М раствор уксусной кислоты — 5,7 см3 ледяной уксусной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды), В (0,1 М раствор ортофосфорной кислоты— 6,45 см3 ортофосфорной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды) и С (0,1 М раствор орто-борной кислоты — 6,18 см3 ортоборной кислоты растворяют в 1 дм3 дистиллированной воды) и различных количеств 1 и. раствора гидроксида натрия (40 г NaOH растворяют в 1 дм3 воды) —получают буферные растворы с рН от 1,8 до 12,0; 0,5 М универсальный буферный раствор — готовится смешиванием пятикратных количеств растворов А, В и С; 0,01 М универсальный буферный раствор—? готовится смешиванием девяти объемов дистиллированной воды с одним объемом 0,1 М универсального буферного раствора; 0,3М раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ) — 50 г трихлоруксусной кислоты разводят дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм3 и фильтруют; 1 н. раствор соляной кислоты — 82,2 см3 соляной кислоты разбавляют в 1 дм3 дистиллированной воды; 0,5 М раствор карбоната натрия — 53 г безводного карбоната натрия разводят дистиллированной водой в мерной колбе на 1 дм3; реактив Фолина (основной раствор) — 100 г вольфрамата натрия и 25 г молибдата натрия вносят в круглодонную колбу вместимостью 2 дм3 с пришлифованным обратным холодильником, добавляют 700 см3 дистиллированной воды, 50 см3 85%-ного раствора ортофосфорной кислоты плот-костью 1,869 г/см3 и 100 см3 концентрированной соляной кислоты; смесь кипятят на слабом огне на асбестовой сетке в течение 10 ч, охлаждают, переносят в колбу Эрленмейера, стенки колбы и холодильник ополаскива-ют»50 см3 воды, затем туда же добавляют 150 г суль37 фата лития и 5 капель брома. Открытую колбу нагревают и кипятят содержимое под тягой на слабом огне 15—20 мин, чтобы удалить пары брома (раствор должен иметь желтую окраску. Если раствор зеленый, то обработку бромом повторяют). После охлаждения раствор доводят дистиллированной водой до 1 дм3 и фильтруют через трубку Аллина, заполненную стеклянной ватой. Концентрацию кислоты проверяют титрованием разбавленного в десять раз реактива Фолина 0,1 и. раствором NaOH по фенолфталеину. Приготовленный раствор хранят в склянке из темного стекла. Рабочий раствор Фолина готовят разведением основного раствора дистиллированной водой в два раза; 0,2 н. раствор соляной кислоты—16,45 см3 соляной кислоты разбавляют дистиллированной водой до 1 дм3.

Приготовление растворов ферментных препаратов. 0,1 —1,0 г исследуемого препарата отвешивают на аналитических весах, тщательно растирают в стаканчике стеклянной палочкой с небольшим количеством 0,1М универсального буферного раствора с рН соответственно для кислых лротеиназ 2,5±0,2 и 5,5±0,2; для нейтральных— 7,2 + 0,2, для щелочных — 9,5±0,2. Затем количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 ом3 и доводят этим же универсальным буферным раствором объем жидкости до метки.

Приготовление 2%-ного раствора казеината натрия (субстрат). 2 г воздушно-сухого казеината натрия растворяют в 90 см3 0,1 М буферного раствора с рН соответственно для кислых протеиназ 3,5 (рН раствора затем доводят до 2,5 добавлением 1 н. раствора соляной кислоты) и 5,5 (для доведения рН до 5,5 также используется 1 н. раствор соляной кислоты), для нейтральных— 7,2 (доводят с помощью 1 н. раствора NaOH), для щелочных — 9,5 (также используется 1 н. раствор NaOH). Затем раствор переносят в мерную колбу на 100 см3 и доводят объем до метки 0,1 М универсальным буферным раствором с соответствующим рН.

Для сокращения времени растворения казеината натрия раствор готовят при нагревании до 70°С на магнитной мешалке. Срок хранения 2%-ного раствора казеината натрия не более 2 сут (в холодильнике).

Техника определения. Для определения ферментативной протеолитической активности проводят фермен-38 тативный гидролиз при 1%-ной концентрации белка-субстрата в растворе (после смешивания раствора субстрата и раствора фермента). Количество взятого фермента должно быть рассчитано так, чтобы присутствовал большой избыток субстрата и чтобы измеряемые величины оптической плотности лежали в области 0,07—0,85 для кислых протеиназ и 0,20—0,60 — для нейтральных и щелочных протеиназ.

В две пробирки наливают по 2 см3 субстрата и помещают их в ультратермостат при 30°С. Примерно через 10 мин в каждую пробирку приливают по 2 см3 раствора фермента, пробирки встряхивают и оставляют на гидролиз ровно на 10 мин при 30°С. Через 10 мин добавляют в обе пробирки по 4 см3 0,ЗМ раствора ТХУ, чтобы прервать ферментативную реакцию и осадить белок и высокомолекулярные продукты гидролиза. Быстро перемешивают смесь и для обеспечения полного осаждения выдерживают пробирки со смесью при 30°С еще 20 мин, затем фильтруют через .маленькие воронки с бумажными фильтрами в сухие пробирки. Фильтрат должен быть совершенно прозрачен. Отбирают в чистые пробирки по 1 см3 фильтрата, добавляют по 5 см3 0,5 М раствора карбоната натрия, перемешивают и быстро, при непрерывном перемешивании, придивают по 1 см3 рабочего раствора р

страница 13
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60

Скачать книгу "Лабораторный практикум по технологиям ферментных препаратов" (1.58Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
электрические камины для тв
set olympic man новосибирск
хлебницы из нержавеющей стали купить
Фарфор Цветущий сад

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(28.02.2017)