химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

тоды хроматографии, электрофорез, гель-фильтрация и изофокусирование. Очень интересные работы по выделению липаз проведены К. Даврановым, М. Рахимовым и А. М. Без-бородовым (1984) на основе глубинной культуры Oospora lactis. Авторам удалось разработать условия получения внеклеточного и внутриклеточного ферментов. Ими было показано, что О. lactis содержит три формы липазы. Одна из них с молекулярной массой 43000 локализована в периплазматическом пространстве и может секретироваться во внешнюю среду в неизменном виде, пополняя содержание внеклеточной липазы в среде. Две другие формы с молекулярными массами 65 000 и 40 000 прочно связаны с мембранами и могут быть солюбилизированы только с помощью детергентов. Первоначально выделение внеклеточных ферментов проводят растворителями, в частности изопропиловым спиртом, и далее следует очистка на сефадексах. Внутриклеточную липазу выделяют из гомогенатов мицелия. Этапы выделения и степень очистки представлены в табл. 2.36.

Для выделения и очистки мембраносвязаиной формы липазы можно использовать аффинную хроматографию на групповом биоспецифическом сорбенте, представляющем собою иммобилизо242

120 100 100,00 0

2500 46 2,24 20

15000 45 0,36 125

18 500 34 0,21 154

14600 25 0,20 110

ные формы липазы

120 100 100,00 0

2350 96 4,85 20

2500 92 4,40 25

Внутриклеточная липаза (п ерипл а зма тичес ка я форма)

Бесклеточный гомогенат мицелия О. lactis Сефадекс С100 КМ-целлюлоза ДЭАЭ-целлюлоза Сефадекс G-100

Солюбнлизироваиный материал Биоспецифическая (аффинная) хроматография иа полиамидкефалиие Сефадекс G-75

ванный на гранулированном полиамиде кефалин. Такой способ позволяет получить гомогенную липазу.

Из фильтрата культуральной жидкости R. oryzae был выделен препарат высокоочищенной липазы со степенью очистки 102 и активностью липазы 13,3% исходной, равной 289 500 ед./мг белка. Установлено, что лнпаза R. oryzae активно расщепляет оливковое масло (принято за 100 %), практически так же — хлопковое масло и животный жир, несколько лучше — маргарин (118 %) и особенно интенсивно — микробный жир дрожжей С. guilliermondii (196,2%). При изофокусировании на амфолинах фермент фокусируется одним пиком при рН 3. Молекулярная масса фермента 108 000, оптимальная температура 35°С, рН 6,0, фермент стабилен в диапазоне рН от 4 до 8. Фермент имеет субъединичную структуру.

Следует сказать, что липазы в высокоочищенной и гомогеииом виде выделены из очень многих организмов со степенью очистки по сравнению с исходной культурой 20—960 и выше. Выход активности в препарат также очень разный — от десятых долей процента до 32 %. Такой большой разброс данных связан с выбором продуцента, составом среды, способом выделения, а главное — со свойствами выделяемых липаз. Вероятно, наилучшие результаты в дальнейшем будут получены при использовании специфической сорбции и аффинной хроматографии для выделения и очистки липаз. Так, японская фирма «Тойокодьо» запатентовала способ очистки липаз с использованием сорбентов в виде солей высших жирных кислот, которые формируются в виде гранул или микрокапсул. Фермент сорбируется в них, а затем элюируется ПАВ. Такой способ позволяет получать высокоочищенные препараты с активностью до 90—95 % исходной. Биоспецифическая хроматография, безусловно, самый перспективный метод выделения липаз и других ферментов. Однако широкое внедрение метода в производство ферментов сопряжено с определенными трудностями: малая доступность веществ, используемых в качестве ли-гандов, малая емкость сорбентов, их высокая стоимость и т. д. В литературе сравнительно мало данных об использовании иммобилизованных липаз и способах их иммобилизации. Вероятно, это связано с тем, что липазы являются особым ферментом, гидроли-зующим субстрат исключительно в гетерогенной среде.

В мире мало выпускается высокоочищенных липолитических препаратов, чаще всего они выпускаются в виде комплексных препаратов, содержащих помимо липазы протеазу, амилазу, иногда целлюлазу и пектиназу. Препараты, обладающие липолитиче-ской активностью, выпускаются в США (фирмы «Mi!es Chemical* и «R5hm & Haas*), Японии («Атапо», «Djennihon Seikage*, «San-kyo», «Mcito», «Sangyc», «Nagase»), в ФРГ («Hoechst», «Theerhe-mi-Askala»), во Франции («Rapidase») и Нидерландах («Gist Brocades*). У нас осваивается промышленная технология липаз.

2.6. ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ

Ферменты, обладающие способностью гидролизовать белки, широко используются в самых различных отраслях промышленности, сельском хозяйстве и медицине. Протеолитические ферменты выпускаются промышленностью в большом количестве, это крупнотоннажное производство. Протеииазы применяются в пищевой технологии, где идет процесс с использованием микроорганизмов (дрожжи, молочнокислые бактерии и др.). Введение в процесс протениаэ позволяет в результате гидролиза белков обрабатываемого сырья обеспечить дрожжам нормальные условия жизнедеятельности, что улучшает весь технологический процесс, особенно в пивоварении, спиртовой промышленности, винодел

страница 97
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
стол под телевизор
Компания Ренессанс: облицовка металлической лестницы деревом - всегда надежно, оперативно и качественно!
мерседес автобус вип аренда
курсы парикмахер универсал москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)