химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

но не используется, так как концентрация сухого вещества в культуральной жидкости, как правило, низкая. Поэтому перед сушкой методом распыления фильтрат культуральной жидкости или культура вместе с биомассой концентрируются, затем вносятся наполнитель, стабилизатор и после этого Смесь направляется на сушку. При сушке и концент рировании очень большое значение имеет правильный выбор стабилизатора фермента и температурного режима процесса. Таким примером могут быть данные Г. Е. ИндисовоЙ (1983), приведенные в табл. 2.10 и на рис. 2.10.

Таблица 2.10

Потерн, %

Состав концентрируемой жидкости И стабилизатор» сухого ГЛЮКОАИНЛА I ?

вещсстна НОН АКТИВНОЕгн

Фильтрат культуральной жидкости (контроль 1) 4,5 32,5

Фил ьтрат-f- {N и jSO- 4,9 14,5

Фнльтрат+№2НР04КН2Р04 (1:19) 4,8 13.4

Фильтрат^-NaHP04KH2PO, (1:19)-f (NH4)2S04 5,0 11,8

Фильтрат-f-кормоные гидролизные дрожжи 4.7 14,2

Из табл. 2.10 видно, что присутствие стабилизатором позволяет значительно снизить потери ферментативной активности а растворах. Введение этих же стабилизаторов в присутствии наполни телей — перлита и коалина — в процессе распылительной сушки позволяет практически полностью предотвратить тепловую инактивацию ферментов.

Не менее важно определение оптимальной концентрации сухо го вещества в высушиваемом растворе и рН, при которой не происходит инактивации фермента. Эти исследования следует проводить для каждого продуцента с учетом состава среды п наполнителя (рис. 2.11).

Для получения очищенных ферментных препаратов из глубинных культур используют традиционные методы концентрирования (ультрафильтрация, вакуум-выпаривание) и методы выделения (органическими растворителями, солями, хроматографией и т. д).

175

Разработанная схема позволяет освободиться от сопутствующей гликозилтрансферазы и амилазы, получить гомогенный препарат с выходом 25% и степенью очистки 37 (по данным М. В. Гернет, Т. А. Лущик и др., 1984).

Еще более простая технология выделения гомогенной а-амилазы из термофильного штамма В. stearothermophilus предложена Е. М. Бечиной, Л. Г. Логиновой и др. (табл. 2.12), которая состоит всего из четырех этапов. Выход препарата составляет 22,1 % и степень очистки — 135,6.

Выход фермента,

Таблица 2.12

Стадия очистки

Удельная активность, ед. АС/мг белка

Фильтрат культуральной жидкости Концентрирование методом ультрафильтрацни Осаждение этиловым спиртом, высушивание осадка методом сублимации

Изоэлектрнческое фокусирование в диапазоне рН 3— 10 с последующим отделением активных фракций от амфолннов на сефадексе G-I5 Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе с ДЭ-32

5,9 10,6 42,5

621,7

800,0

1,0 1,8 7,2

105,3

135,6

100 100 95,0

79,9

В качестве примера можно привести основные этапы очистки глюкоамилазы из глубинной культуры Endomycopsis sp 20-9 (табл. 2.П).

Таблица 2. II

Выход сопутствующих ферментов, %

100 90,0

100

90,0

69,5 64,0 52.5 47,0 40,5 25,0

1.1

4,6 5,4 24,5 25,7 36,5 37,0

100 89,0

11,3 9,1 0,4 0,3

0,2 0,2

36,5 36,2

12,5 10,0 3,6 3,5 3,5 3,5

Исходная культуральная жидкость 7,1

Отделение биомассы, концентрирование 2^3

ферментного раствора

Осаждение ацетоном, растворение в воде 9,7

Ультрафильтрация ц'з

Хроматография на ДЭАЭ-целлюлозе 50,4

Ультрафильтрация 54 [п.

Гель-фильтрация на акрилексе Р-100 76^5

Обессоливание и лиофилнзация 77^0

176

24,0 17,6

5,1

4,5

2,4

Стадия очистки

Представляют интерес работы по выделению, очистке и свойствам р-амилазы В. polymyxa, выполненные под руководством А. А. Глемжи. Предельно простой способ позволяет выделить р-амилазу практически в две стадии путем осаждения этиловым спиртом и методом сорбции на крахмале с последующей десорбцией с крахмала. Было определено, что на 1 г крахмала сорбируется 24—25 ед. фермента. Сорбция проводится путем пропускания ферментного раствора через колонку с крахмалом. Для избежания слеживания крахмала его смешивали с наполнителем — фильтроперлитом — в соотношении 5: 1. Сорбция бактериальной Р-амилазы проводится при 2°С и даже при значительном повышении ионной силы элюирующего раствора не происходит освобождение фермента. При 20°С фермент без изменения условий элюируется с крахмала. Это явление дало основание предположить, что освобождение фермента происходит в результате взаимодействия р-амилазы с образующимся при этой температуре продуктом реакции — мальтозой. Чем выше температура, тем быстрее протекает процесс. Освобождение р-амилазы от протеазы, которая сорбируется на самом ферменте, происходит при использовании специфической сорбции — осаждении комплекса р-амилаза — гликоген этанолом. Характеристика процесса выделения Р-амилазы представлена в табл. 2.13.

Необходимо отметить, что свойства микробных амилаз весьма многообразны. Существуют множественные формы одного и того

177

Таблица 2.13

Стадии очистки Р-амилазы Общер количество белка, мг Р-Амилаз -ная активность, ед. Удельная активность, ед./мг Степень очнсткн Выход, % Общая протеолн-тнческая

страница 72
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
носки forward в саратове
динамики потолочные для кинотеатра
анна каренина мюзикл
как закрепить шашку такси

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(04.12.2016)