химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

н для иммобилизации ферментов, воздействующих на низкомолекулярные субстраты, для иммобилизации полиферментных систем, клеточных органелл и гомогенатов тканей.

Представляет интерес иммобилизация ферментов методом включения их в «жидкие» мембраны, которые состоят из поверхностно-активных воДонерастворимых веществ с различными добавками и углеводородного растворителя (рис. 1.69). Этот метод похож на ми'крокапсулирование, только в жидкой капсуле, которая не смешивается с водой. Этим способом можно иммобилизовать полиферментные системы, химотрипсин, пероксидазу и некоторые другие. Он прост, капсула легко регенерируется после инактивации фермента, в целом система имеет высокое отношение площади к объему, что очень важно. Недостатками этого метода являются возможность утечки ферментов через жидкие мембраны и зависимость переноса субстрата и продуктов реакции через мембрану от их растворимости в ней.

Аналогичен микрокапсулнрованию метод включения ферментов в волокна. Разница заключается в том, что при микрокапсулирования получаются сферы, а при включении в волокна — нити. Метод заключается в растворении образующего волокна полимера в органическом растворителе, эмульгировании полученного раствора с раствором или суспензией фермента и продавливании эмульсии через тонкие отверстия прядильного устройства в коагулирующую жидкость (например, в толуол). Этим способом иммобилизуются многие ферменты: амилазы, В-галактозидаза, глюкоамилазы, глкжозоизомераза, каталаза, лизоцим, липазы, целлюлазыи др.

Есть и другие механические методы иммобилизации: включение в липосомы (рис. 1.70), в мембраны в форме полых волокон и некоторые другие более редкие физические способы иммобилизации.

Химические методы иммобилизации. К этим способам следует отнести иммобилизацию ферментов путем ковалентного сшивания с полимерным носителем и поперечного сшивания ковалентными связями молекул белка без носителя. Химический способ является основным способом получения иммобилизованных ферментных препаратов. Такие препараты стабильны, ферменты не вымываются, уменьшается отрицательное влияние матрицы. Существенным недостатком этого способа часто является значительная инактивация фермента. При химическом способе иммобилизации наиболее широкое распространение получили методы ковалентного связывания фермента с различными носителями, поперечное сшивание молекул фермента используется очень редко (рис. 1.71).

При ковалентной иммобилизации ферментов применяют различные методы закрепления ферментов: бромциановый, азидный, ангидридный, ацилимидазольный, метод активированных эфиров; иммобилизация с помощью карбодиимидов и реагента Вудворда; изо-цианатный и изотиоцианатный; иммобилизация путем азосочетания, алкилирования полимерами, содержащими эпоксидные группы; с помощью хлорпроизводных 1, 3, 5-триазина, имидоэфиров и других соединений; связыванием по сульфгидрильным группам. Возможна ковалентная иммобилизация модифицированных ферментов, которые затем связываются с соответствующим ферментом (рис. 1.72). При использовании этих сложных способов закрепления фермент может инактивироваться на 60—80 % в результате экранирования активного центра и других причин.

Успех иммобилизации во многом зависит от свойств и структуры фермента. Особенно большие сложности возникают при иммобилизации ферментов, имеющих четвертичную структуру. По-видимому, это связано с тем, что при иммобилизации можно прикрепить только одну из субъединиц фермента, что неизбежно приводит к деформации белковой молекулы и, возможно, к инактивации фермента. Тем не менее ферменты с четвертичной структурой успешно иммобилизуются с использованием различных способов.

140

При иммобилизации сохраняют активность алкогольдегидрогеназа, щелочная фосфатаза, каталаза, глюкозооксидаза, инвертаза, ксан-тиноксидаза и ряд других ферментов, причем падение их активности наблюдается только частично.

Большие сложности возникают при иммобилизации ферментов, имеющих в своем составе простетические группы (кофакторы). Большинство простетических групп (за исключением флавиновых кофакторов) непрочно связано с белком и при иммобилизации отделяется, поэтому для восстановления активности ферментов вместе с субстратом в среду добавляют кофакторы. Но кофакторы в большинстве случаев очень дороги, поэтому возникает проблема их иммобилизации или регенерации.

В последнее время большое внимание в литературе уделяется вопросам иммобилизации клеток микроорганизмов и использования этих систем для осуществления ферментативных реакций. Этот способ иммобилизации особенно интересен для использования внутриклеточных ферментов. Иммобилизация клеток микроорганизмов — это один из перспективных путей создания высокоактивных полиферментных систем, но пока этот метод развивается медленно.

1.13.4. Свойства иммобилизованных ферментов

Иммобилизованные ферменты по своим свойствам отличаются I от нативных, поскольку в результате иммобилизации в той или 1 иной мере изменяется пространственная структура белковой мо- | лекулы.

Активнос

страница 59
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
билет на концерт филиппа киркорова
магазин японских ножей
кухни распродажа в январе 2016
двух дневный курсы парикмахера в москве

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(07.12.2016)