химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

енин и рибоза красителя. Краситель более прочно связывается с ферментом, чем субстрат. Хотя краситель носит название «голубой декстран», декстрановый компонент служит лишь для связи красителя с агарозой. Краситель как бы выполняет роль гигантского лиганда, хотя по механизму адсорбции и поведению он не имеет полного сходства с обычным лигандом, поэтому правильнее окрашенные адсорбенты отнести к псевдоаффинным адсорбентам. Их основная особенность заключается в том, что они способны прямо присоединяться'непосредственно к остову матрицы. При этом возможности их связывания с ферментами не снижаются и при использовании красителей отпадает необходимость в создании мостика между матрицей и лигандом.

Но красители могут сорбировать только белки, связывающие нуклеотиды, в связи с чем этот вид сорбентов проявляет сродство ко всем белкам, связывающим нуклеотиды, и адсорбирует их. Поэтому с помощью этого вида хроматографии нельзя добиться высокой степени очистки данного фермента в отличие от истинной аффинной адсорбции. Однако в последние годы достигнуты большие успехи в совершенствовании метода окрашенной адсорбционной хроматографии. Ряд фирм начали выпуск окрашенных адсорбентов. Например, фирма «Амикон» проверила около 90 различных красителей на способность связывать целый ряд ферментов и предложила специальный набор из пяти красителей, которые обладают специфическим сродством к различным группам ферментов. Вероятно, в будущем этот вид адсорбционной хроматографии с использованием красителей будет применяться для очистки ферментов.

Иммуноадсорбция. В последнее время уделяется внимание использованию иммуноадсорбентов для получения особо чистых препаратов ферментов. Суть метода заключается в следующем. Абсолютно специфическим адсорбентом для любого фермента или белка является антитело к этому белку, которое связано с нерастворимой матрицей. Антитела обладают высокой избирательностью только к тем белкам, против которых они были получены. Поэтому при использовании нммуноадсорбента можно получить препараты фермента более чистые, чем на любом другом типе аффинно127

го адсорбента. Иммуноадсорбенты — это специализированные биоспецифические адсорбенты. Сложность получения антител задерживает широкое внедрение этого способа очистки и выделения ферментов, но развивающаяся сейчас новая технология получения моноклональных антител может в самое ближайшее время дать развитие этому интересному способу очистки ферментов.

В настоящий момент методика очистки ферментов с помощью иммуноадсор-бентов заключается в следующем. Целевой фермент ныделяют до высокоочи-щенного гомогенного состояния традиционными методами из культуры, которая будет в дальнейшем использоваться как продуцент этого фермента. Для получения антител к ферменту чаще всего берут кролика и иммунизируют его согласно обычной технике. Далее берут кровь кролика и проводят в ней определение антител существующими методами. Антитела из сыворотки крови кролика частично очищают, осаждая их сульфатом аммония концентрацией 33 % полного насыщения. Затем антитела связывают с адсорбентом, например с активированной бромцианом или тозилхлоридом агарозой, и иммуноадсорбент готов. Очищаемый ферментный препарат пропускают через этот адсорбент, при этом в колонке на антителах удерживается только нужный фермент. Затем колонку промывают от случайно задержавшихся примесей и производят элюцию адсорбированного на антителах фермента.

Наиболее сложным в этом методе является получение антител к Данному ферменту. Часто наличие небольшой, даже экспериментально неопределяемой белковой примесн к ферменту, используемому для иммунизирования кролика, приводит к тому, что наряду с нужными антителами будут накапливаться и посторонние. В этом случае получить чистый фермент уже невозможно. Другую сложность в этой технологии представляет стадия элюции адсорбированного фермента. Силы взаимодействвя между антигеном и антителом очень велики, величина коэффициента распределения а стремится к единице, и ослабить эти взаимодействия очень трудно. Важно, чтобы фермент был достаточно стабильным, так как элюння ведется в жестких условиях при высоких концентрациях солей, критических величинах рН, с использованием холодной дистиллированной воды и т. д. Для удаления антигена применяют электрофорез. При значениях рН, когда антиген достаточно сильно заряжен, под действием электрического тока антиген медленно перемещается с поверхности адсорбента в раствор, что способствует элюции фермента. Используют также и другие методы элюции. Иммунизируя различных животных, стараются получить такие антитела к данному ферменту, в которых связи соответствующего антитела с ферментом былн бы менее прочные. Чаще всего процесс очистки ферментов с помощью иммуноадсорбентов ведут не в колонке, а в объеме, т. е. в емкости при периодическом перемешивании, так как процесс иммуноадсорбции фермента идет очень медленно. По этой же причине элюцию также удобнее проводить в объеме.

В целом о всех видах ионообменной хроматографии белков (ферментов)

страница 53
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
linea cali ручки дверные
http://taxiru.ru/zakon69-2/
замена гофр глушителей honda
https://mebelstol.ru/stulja/stulja_/stul_dik_sibarit_35_11/

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(16.12.2017)