химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

ванных с б5ю« ^cZHrc' •«ете е се.ыо отрицательно ааряже». „ь?Гя иойьТГи» иоиооб-енник» (по датша Р. Седпсв. 1985)

123

скорость движения соли больше, чем белков, последние постоянно подвергаются воздействию высоких концентраций соли. Это приводит к тому, что зоны расположения белков сужаются и как бы уплотняются, что обеспечивает более высокое фракционирование белков на выходе из колонки.

Удаление адсорбированного на ионообменнике фермента или других неспецифических адсорбентов можно провести с помощью аффинной элюции. Аффинная элюция осуществляется путем введения в колонку с ферментом специфического лиганда, который избирательно связывается с адсорбированным белком. Прн этом коэффициент распределения (а) резко снижается, и белок вместе с ли-гандом удаляется из колонки (рис. 1.62). Самая большая сложность — это найти лиганд, который бы мог «узнать» нужный фермент и «снять» его с сорбента. Для того чтобы элюция шла успешно, в колонку с адсорбированным ферментом вносят раствор лиганда, концентрация которого должна превышать по величине константу диссоциации комплекса фермент — лиганд. Если молекул фермента много, то общее количество лигаида (в М) должно быть больше количества центров связывания (в М), но в то же время концентрация лиганда не должна существенно изменять ионную силу буфера. Если элюцию проводят с "катионообменника, то лиганд должен иметь отрицательный заряд, а при очистке на анионо-обменнике — положительный. Если лиганд не будет соответство-- вать ионообменнику по заряду, то ои может сам адсорбироваться на ионообменнике, и аффинная элюцня будет сильно затруднена. Специалисты считают, что это наиболее перспективный метод элюции нужного фермента без сопутствующих примесей в мягких условиях.

Аффинная адсорбционная хроматография. Среди методов адсорбционного разделения и очистки белков и ферментов этот метод занимает особое место. Часто его называют аффинной хрома125

тографией, или более точно биоаффинной, или биоспецифической хроматографией.

Ее суть заключается в том, что многие биологически активные соединения, в том числе и ферменты, имеют исключительную способность специфически и обратимо связываться с другими веществами, которые принято называть лигандами, аффинными лигандами или просто аффинатами. Если такой лиганд (Л) ковалентко соединить с нерастворимой инертной матрицей (М), то получится специфический адсорбент, на котором будут адсорбироваться только ферменты (Ф), имеющие сродство к данному лиганду. Остальные же вещества (В) и белки (Б) будут транзитом проходить через колонку (рис. 1.63).

рующие субстраты

Варьируя условия процесса и используя специальные элюенты, которые изменяют сродство лиганда к ферменту, можно вызвать десорбцию белка и получить практически в один прием высокоочищенный ферментный препарат. Подбор носителя и ли-гаидов — задача очень сложная. Только в некоторых случаях можно найти лиганды в виде существующих соединений, имити-или являющиеся настоящими субстратами (крахмал, пектин, целлюлоза), которые можно использовать при создании аффинных сорбентов. В большинстве случаев аффинные адсорбенты требуется синтезировать с учетом свойств очищаемого фермента. Этот процесс имеет и другие сложности. Например, сорбенты могут быть невысокоспецнфнчными и удерживать не только очищаемый фермент, но и ряд других белков, что осложняет и удлиняет очистку. Для аффинной хроматографии используют различные нерастворимые сорбенты, но все большее распространение получают поперечно сшитые гранулы агарозы, так как они достаточно прочные, не разрушаются и сохраняют форму под давлением, при смеие буфера илн в присутствии различных растворителей.

К лнгаидам предъявляется ряд жестких требований: онн так должны присоединяться к матрице, чтобы не был затруднен подход белка к лиганду; желательно, чтобы между матрицей и лигаи-дом был мостик, что облегчает доступ к лиганду; необходимо, чтобы лигаид не взаимодействовал с другими соедниениями, имел прочную связь с'матрицей, которая была бы стабильна при адсорбции фермента, его последующей элюции, регенерации и очистке колонки с сорбентом. Даже простой перечень требований к лиганду и матрице показывает, что это сложный и трудиовыполни-мый процесс. И хотя с помощью аффиииой хроматографии очище126

т

ны и выделены десятки ферментов, этот метод не является пока общепринятым и распространенным в технологии ферментных препаратов. Но это перспективный метод очистки и разделения белков.

Хроматография на окрашенных адсорбентах и иммуноадсорбен-тах. Этот метод очень близко примыкает к аффинной хроматографии. Впервые присоединение фермента к красителю («цибакрон голубой F3GA»— голубой декстран) было замечено при выделении пируваткиназы. Затем было установлено, что и другие ферменты проявляют сродство к этому красителю, особенно дегидрогеназы. Связывание этого высокомолекулярного растворимого красителя, используемого в качестве маркера при гель-фильтрации, с ферментом происходит в месте присоединения к белку НАД, и в этом связывании участвуют ад

страница 52
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
дверь краснодеревщик 705
7.7113.20
salice paolo madrid
сетка сварная 7 7

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.06.2017)