химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

льзуют полиэтиленгликоль (ПЭГ) двух типов с молекулярными массами 6 ООО и 20 ООО. Осаждение белков в растворах ПЭГ сходно с их осаждением в органических растворителях, так, растворимость ферментов в растворах ПЭГ возрастает по мере отклонения рН от их изоэлектрической точки. Но для проведения осаждения требуются низкие концентрации ПЭГ. Полиэтиленгликоль можно добавлять в виде концентрированного (50%) водного раствора до содержания его в смеси 6—12 %. Процесс можно вести при комнатной температуре, так как ПЭГ оказывает на белок стабилизирующее воздействие. Сам реактив сравнительно дешев, и он используется в ряде стран для осаждения ферментов в промышленных масштабах. ПЭГ труднее удалить из ферментной фракции, чем соль или органический растворитель, но поскольку он не оказывает отрицательного воздействия на белок при его дальнейшем выделении (высаливание, ионообменная хроматография, адсорбция и т. д.), его часто не удаляют совсем.

Есть данные об использовании при выделении белков заряженных полимеров, например полиэлектролитов в 'очень низких концентрациях (от 0,05 до 0,1 %). Поскольку осаждение чаще всего ведут при низких значениях рН (от 3 до 6), которые многие ферменты не выдерживают, а величина положительного заряда многих ферментов очень мала, большинство ферментов плохо осаждается этими полимерами. Но ряд ферментов, такие, как лизоцим, трипсин, пепсин, осаждается хорошо. Считают, что положительно заряженные полимеры, подобные ДЭАЭ-декстрану, эффективно осаждают кислые белки при щелочных значениях рН. Осадителя-ми ферментов могут быть соли каприловой кислоты, риванол и многие другие соединения, имеющие как гидрофобные, так и полярные свойства, но пока способы осаждения этими реагентами очень мало изучены.

Для осаждения некоторых ферментов можно использовать ионы металлов, с которыми белки образуют соли, имеющие пониженную растворимость. Так, для выделения р-галактозидазы из разрушенных клеток Е. coli успешно используются ионы Мп2нПосле удаления ионов Мп^+ происходят полное восстановление фермента и его одновременная очистка от 30—40 % сопутствующих нуклеиновых кислот. Но этот метод осаждения не получил широкого распространения из-за того, что выделение фермента из образующихся солей металлов затруднено и сопровождается инактивацией и денатурацией фермента.

1.10.4. Осаждение ферментов путем избирательной денатурации

Этот способ выделения приемлем только для стабильных ферментов, сохраняющих устойчивость в экстремальных условиях внешней среды, например глюкозоизомеразы, которая выдерживает температуру до 90—95 °С. Помещая такие ферменты в смеси с сопутствующими белками в экстремальные условия, можно вызвать денатурацию ненужных белков. Денатурированные белки можно осадить и удалить, а в растворе останется целеной фермент. Для проведения избирательной денатурации используют три фактора: температуру, рН и воздействие органическими растворителями, которые можно применять по отдельности или комбинировать их.

Термическая денатурация. Этот вид денатурации нецелевых белков достаточно часто применяется на начальных стадиях очистки термостабильных ферментов. Для защиты основного фермента при термообработке используют специфический стабилизирующий эффект субстрата, в присутствие которого фермент лучше переносит термическое воздействве. Говоря о тепловой денатурации, важво помнить о возможности возникновения процесса протеолиза, который активируется при повышенной температуре и может отрицательно сказаться на свойствах выделяемого фермента. Для предотвращения протеолиза термическую денатурацию ведут в присутствии высоких концентраций сульфата аммония. Тепловая избирательная денатурация требует строжайшего соблюдения условий проведения процесса: температуры, длительности обработки, скорости охлаждения и особенно рН среды. Этот способ чаще используется в лабораторных исследованиях и очень редко — иа производстве.

а/ккпростатичеаие притяжения

Избирательная денатурация под воздействием рН. Это более распространенный прием очистки и фракционирования ферментов, чем термическая денатурация. Суть метода заключается в том, что при экстремальных значениях рН происходит денатурация нецелевых белков. Денатурацвя происходит потому, что отдельные участки белковой молекулы приобретают большое количество зарядов одного знака или теряют их, что приводит к отталкиванию этих участков друг от друга нли их притяжению (рис. 1.60). Все это приводят к денатурации белковой молекулы. рН-денатурация — сложный процесс, который может протекать как при значениях рН, близких к изоэлектрической точке белка, так и далеких от нее. Скорость денатурации в кислых и щелочных условиях ие совпадает со скоростью протоиирования (она мгновенна). Скорость) разворачивания глобулы лимитирует скорость всего процесса. Для каждой смеси белков должны экспериментально устанавливаться режимы изменения рН, температуры и длительности экспозиций для проведения рН-денатурации. Важно также и то, какими кислотами или щелочами устанавливается нужное значение

страница 50
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
аквапарк лукоморье евпатория цены
Самое выгодное предложение в KNS - Эпл МакБук Про - более 17 лет на рынке, Москва, Дубровка, своя парковка.
сетка сварная купить иваново
сумка ju ju be bff

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(23.05.2017)