химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

жжам при аэрации (Юм3 воздуха в минуту на 1 т прессованных дрожжей) добавляют обедненную по углеводу среду, содержащую необходимый набор питательных солей. Углерод вводится в виде 20 %-иого раствора мелассы (по сахару) из расчета 160 г сахара на 1 кг сухой массы дрожжей. Активация проводится в течение 8—10 ч при температуре 30°С, в результате содержание ин-вертазы в дрожжах увеличивается в 5—10 раз.

Разрушение дрожжевой клетки. Дрожжевая клетка имеет плотную трудноразрушаемую оболочку. Для разрушения ее используют различные способы: 1) механический — растирание при низких температурах или прессование под высоким давлением; 2) термический — обработка при температуре 60—70°С в течение 5—10 мин. Клетки гибнут, й проницаемость клеточных стенок повышается, однако при этом возможна частичная инактивация нивертазы; 3) длительный автолиз в течение 4—5 сут при 45—48 "С; 4) разрушение клеток чередованием замораживания и оттаивания. При этом образуются кристаллы льда внутри клетки и клеточная оболочка разрывается; 5) действие ультракоротких волн и ультразвука; 6) воздействие капиллярно-активных ядов бензола, хлороформа, толуола и т. д.

В приведенной выше схеме разрушение клеточных стенок проводится бензолом, который добавляют к активированным дрожжам из расчета 0,8 % сухой массы дрожжей и выдерживают при 30 °С с периодическим перемешиванием в течение 5 сут. Остатки клеток отделяют центрифугированием, вся инвертаза переходит в. надосадочиую жидкость.

Получение очищенных препаратов. Надосадочиую жидкость подкисляют уксусной кислотой до рН 5,5—5,0 и охлаждают до 0°С. Выпавший осадок отделяют, к раствору добавляют охлажденный до 2—5°С этиловый спирт в соотношении 1: 1,5. Процесс ведут при 6—7°С. Осадок фермента отделяют центрифугированием. Так как препарат в сухом виде быстро теряет активность и плохо растворяется, то непосредственно после центрифугирования осадок растворяют в небольшом количестве воды и для повышения стойкости фермента добавляют глицерин до концентрации его в растворе 25%. Такой препарат хранится в стеклянной таре не менее 2 лет.

Высокие концентрации сахарозы предохраняют 6-фруктофура-нозндазу от термической инактивации. Так, при концентрации сахарозы 20—30 % и рН около 4,5 фермент сохраняет активность при температуре до 55—60 °С. Фермент чувствителен к свету и в присутствии кислорода легко разрушается. Инактивируется фермент при действии постоянного тока и при длительном воздействии ультразвука.

Получение препаратов инвертазы из культур микроскопических грибов. В нашей стране Ю. 3. Серовой разработана технология получения препаратов 6-фруктофуранозидазы на основе глубинного культивирования Aspergillus awamori 16, продуцирующего внеклеточный фермент. При выборе питательной среды необходимо изучить влияние отдельных ее компонентов на биосинтез фермента, а также подобрать оптимальные условия роста культуры.

Источник углерода. В состав сред вводились различные углеродсодержащие соединения: глюкоза, фруктоза, галактоза, арабииоза, рамноза, сахароза, лактоза, мальтоза, раффиноза, инулин, декстрины, крахмал, инозит, маннит. Наивысший синтез внеклеточной 6-фруктофуранозидазы наблюдался только в присутствии инулина, декстринов и особенно крахмала. При изучении влияния почти тех же компонентов среды Aureobasidium pullulans наилучшие результаты получаются на манните, несколько хуже на раффинозе и глицерине.

Источник азота. Обычно в качестве источника азота используют нитрат натрия, сульфат аммония, казеин, пептон, аммонийные соли фосфорной кислоты и некоторые органические источники азота, такие, как соевая мука. На примере A. awamori показано, что наивысшие результаты по биосинтезу фермента и росту биомассы получаются на среде, состоящей из мелассы (6%) и NaNOj (0,9%).

Источник фосфора. В качестве источников фосфора можно применять соли калия, аммония, натрия фосфорной кислоты. Наилучшим источником фосфора является КН2РО<.

764501

Условия культивирования. Учитывая все эти данные. Ю. 3. Серовой была проведена оптимизация состава питательной среды с использованием математических методов планирования эксперимента, что позволило получить культуральную жидкость с активностью до 75—80 ед./мл. Было установлено, что посевной материал должен вноситься в среду в количестве 0,5 % на 36 ч роста культуры, рН среды в начале роста культуры должен быть

320

321

6,0, температура—28—33°С, аэрация — 1,4 г Ог/(л-ч)~', длительность культивирования составила 120 ч. В результате проведения этих опытов удалось повысить продуцирующую способность микроорганизма в 15—20 раз и разработать рентабельный процесс получения высокоактивной культуральной жидкости.

Выделение ферментов. На основе фильтрата культуральной жидкости традиционными способами были получены очищенные препараты р-фруктофуранозидазы. При изучении влияния рН ферментного раствора было установлено, что наибольший выход активной р-фруктофуранозидазы наблюдается при рН 5,8—6,8. Фермент достаточно хорошо осаждается органическими растворителями. Под действие

страница 133
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
форма фан
space-motion интерактивный космический аттракцион
матрас аскона 180 х 200 см спб интернет магазин
концерт в дк подмосковье красногорск

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(26.07.2017)