химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

В таких случаях культуральиую жидкость очищают от взвеси, фильтрат подвергают очистке и концентрированию методом ультрафильтрацни и далее осаждают органическими растворителями или сульфатом аммония. Для осаждения применяют этанол (1,5-^-4: 1), ацетон (0,75-н1,5: 1), изопро-панол (1,5-г-2:1). Большое влияние иа соотношение растворителя и ферментного раствора оказывает степень концентрирования последнего. Чем оиа выше, тем меньше расход растворителя. При высаливании в зависимости от продуцента, состава среды и степени концентрирования используется различная концентрация сульфата аммония — от 0,9 до 0,45 полного насыщения.

Препарат В-галактозидазы получают путем распылительного высушивания фильтратов и ультраконцентратов. Для успешного проведения этого процесса используют стабилизаторы (например, соли магния) и различные наполнители (NajSO^ NaCl, лактоза, молочная сыворотка и др.). Наиболее благоприятный температурный режим, по мнению большинства авторов, следующий: 120°С иа входе и 60"С на выходе. Потери в этом случае не превышают 1—3 %, а влажность готового препарата составляет 5,5—7 %.

Для получения высокоочищенных и гомогенных ферментных препаратов используются сочетания таких методов, как диализ, гель-фильтрация на сефадексах, хроматография на ДЭАЭ-, SE- и КМ-сефадексах, ДЭАЭ-, КМ-целлюлозах, гидроксилапатите и других носителях, изоэлектрическое фокусирование, афиииая сорбция и т. д. В нашей стране фундаментальные исследования в этом направлении на различных продуцентах были проведены в Институте биохимии АН СССР А. С. Тихомировой (табл. 2.49).

Данные таблицы показывают, что в зависимости от вида продуцента и используемой схемы очистки можно получить препараты с различной удельной активностью от 52 до 160 ед./мг белка. Анализ стадий выделения показывает, что вполне реально получать гомогенные ферментные препараты из культур микроорганизмов, особенно из микроскопических грибов. Эти стадии достаточно просты, и выход препарата сравнительно высокий. Характеристика всех трех препаратов была дана в табл. 2.47. Но пока в нашей стране ие иалажеи промышленный выпуск микробных препаратов высокоочищенной и гомогенной В-галактозидазы, хотя потребность в ней для аналитических и медицинских целей достаточно большая.

Иммобилизованные препараты. Практический интерес имеют исследования по получению В-галактозидазы в иммобилизованном виде, которые проводятся многими исследователями. Важные исследования в этом направлении в нашей стране были проведены С. В. Ельчиц, В. Б. Пичко иа продуцентах Curvularia inaequalis и Saccharomyces fragilis; А. И. Кестнер, К. Э. Паппель на С. inaequalis; В. К. Антоновым, В. С. Баевой на том же продуценте;

310

311

Л. А. Нахапетяном, Н. М. Самошиной на В-галактозидазах нз P. canescens, С. inaqualis и A. oryzae. Были получены стабильные препараты иммобилизованной В-галактозидазы с использованием ацилирования белков и иммобилизации на КМ-целлюлозе. Активирование карбоксильных групп полимера происходило с образованием азида. Были получены препараты путем включения фермента в полиакриламидный гель, а также путем связывания В-галактозидазы с полимером (снланизнрованным снлохромом СХ-2), содержащим NHj-группы, с помощью бифункционального реагента (глутарового альдегида).

Для иммобилизации В-галактозидазы был также использован принципиально новый метод адсорбции. Фермент модифицировали включением хлортриазинового красителя — ярко-оранжевого КХ — с введением в фермент анионных и гидрофобных активных групп. Модификация не затрагивала группировок, связанных с осуществлением каталитического акта. Краситель соединялся с В-галакто-зидазой (2:1) прн добавлении к ферменту шести сульфогрупп. Такая модификация фермента позволяет использовать широкий круг носителей с различными физическими свойствами. В качестве носителей использовались различные анионнты. Наилучшие результаты были получены при модификации высокоочнщенной В-галактозидазы, иммобилизации ее на ДЭАЭ-сефадексе, активность фермента достаточна — 380—400 ед./г носителя.

312

Успешно проведена ковалентная иммобилизация В-галактози-даз на силохроме С-80, обработанном различными модификаторами (у-АПТЭС, ТЭСУК, 8-триэтоксисилил-6-октанлактам), т. е. соответственно на аминосилохроме, карбоксилохроме и аминокарбо-ксилохроме. Наилучшие результаты получены при иммобилизации на неорганическом носителе, модифицированном карбоксильными группами.

Применение иммобилизованной В-галактозидазы дает ощутимый экономический эффект за счет многократного и длительного использования фермента и в результате резкого снижения загрязнения белком (ферментом) обрабатываемого субстрата. Использование иммобилизованой В-галактозидазы следует считать перспективным во многих отраслях.

2.11. ПРЕПАРАТЫ Р-ФРУКТОФУРАНОЗИДАЗЫ

Препараты 6-фруктофураиозидазы применяются в технологических процессах, где необходима инверсия сахарозы. Наиболее широко фермент используется в кондитерской промышленности при производстве помадных изделий. Эти изделия быстро черствеют при

страница 129
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
помощь в трудовых спорах в москве
Swiss Military by Chrono SM34042.02
курсы визажистов в москве второй этап
аренда микроавтобус мерседес 20человек свадьба москва

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(05.12.2016)