химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

х экстрактах происходит только в том случае, когда к обрабатываемым клеткам добавляют ли-зоцим JV-ацетилмурамидглюканогидролазу (КФ 3.2.1.17). Известно, что лизоцим гидролизует а-1,4-связи между остатками Л'-ацетнл-мурамовой кислоты и 2-ацетамидо-2-дезокси-0-глюкозы в мукопо-лисахариде и мукопептиде, которые входят в клеточную стенку.

При внесении в автолизируемую среду лизоцима клеточные стенки актиномицета разрушаются, они представляют собой разрыхленные сетчатые чехлы, лишенные слоистой ориентации. Эта деструкция, по-видимому, обусловлена разрушением муреинового каркаса. Такое состояние клеточной стенки сопровождается выходом глюкозоизомеразы из клетки, и активность в бесклеточных экстрактах возрастает в 5—6 раз (по данным А. В. Гавристова, 1981). Эти факты и позволяют заключить, что глюкозоизомераза локализована в клеточной стенке и каким-то образом связана с ее муреиновым каркасом.

Учитывая сложность выделения глюкозоизомеразы из клетки и дороговизну лизоцима, большинство предлагаемых промышленных технологий базируются на втором способе получения глюкозоизомеразных препаратов. Первый же способ используется для рыде-ления фермента, изучения его свойств и для получения иммобилизованных препаратов.

После выделения фермента из клеток его можно очистить до гомогенного состояния. Для очистки глюкозоизомераз используют

297

обычные методы выделения: фракционирование сульфатом аммония или органическими растворителями, ионообменная хроматография на ДЭАЭ-сефадексе или ДЭАЭ-целлюлозе, ультрафильтрация, электрофорез, кристаллизация и т. д. Отличительной особенностью выделения глюкозоизомераз является термическая обработка ферментного раствора, при которой термостабильная глюкозоизомераза остается без изменений, а балластные белки денатурируют и выпадают в осадок. Такой прием позволяет значительно очистить фермент от сопутствующих белков.

Выделение фермента в присутствии ионов кобальта, магния и в некоторых случаях марганца значительно повышает стабильность глюкозоизомеразы, что способствует получению активных препаратов с минимальными потерями.

В качестве примера можно привести три схемы выделения высокоочищенной и кристаллической глюкозоизомеразы нз трех различных продуцентов (табл. 2.44).

Эти глюкозоизомеразы, по данным исследователей, были гомогенны, выход активности в эти препараты был относительно высок (от 33 до 36%), а степень очистки отличалась очень сильно, букЭтап очнсткн

Таблица 2.44

Bacillus coagulans HN-68 (по данным Г. Данно, 1970)

Ферментативный лнзат клеток

Обработка ионами Мп2-Ь

Фракционирование сульфатом аммония

Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-сефадексе

(рН 6,0)

Рехроматография на ДЭАЭ-сефадексе (рН 8,6) Кристаллизация

1,0 100

1,5 92

11,0 76

43,0 65

43,5 60

44,0 36

100,0 94,8 94,8 94,6 35,0

Actinomyces о 1 i vo с i п er е u s 154 (по данным И. В. Улезло я др., 1980)

Бесклеточный экстракт 1,0

Фракционирование ацетоном 3,0

Обработка сульфатом аммония —

Обессоливание на сефадексе G-25 8,0

Гель-хроматография на сефадексе G-200 14,0

Streptomyces griseoiuscus S-41 (по данным Т. Касими и др., 1981)

Бесклеточный экстракт Концентрирование вакуум-выпариванием Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-сефадексе (ОН 7,5)

Рехроматография на ДЭАЭ-сефадексе (рН 7,5) Кристаллизация

298

100 86 63

1,0 1,9 3,9

4,2 4,2

55 33

Выход активности, % вально на порядок. Такое отличие было связано со способом выделения фермента из клеток, т. е. с количеством балластных веществ в исходном бесклеточном экстракте.

В литературе есть упоминание о возможности использования аффинной хроматографии для очистки глюкозоизомеразы. В качестве аффинного лиганда был использован конкурентный ингибитор глюкозоизомеразы ксилит, обладающий высоким сродством к ферменту, иммобилизованный на активированной бромцианом се-фарозе (по данным Дж. Г. Ли и др., 1976). Однако этот очень перспективный метод очистки глюкозоизомеразы с использованием аффинной хроматографии не нашел широкого применения из-за сложности подготовки аффинного сорбента.

199 000 190 000 183 000 45000 4

180 000 42 000 4

175 000 49000 3-4

171 000 43 000 4

166 000 40000 4

160000 42 000 4

130 000 13 000

120000 56 000 2

52 000 52 000 1

178 500 46 000 4

165000 41 000 4

Глюкозоизомераза была получена в гомогенном состоянии из очень многих микроорганизмов. Были изучены свойства этих ферментов, которые позволили высказать предположение пространственной организации молекулы, определить молекулярную массу различных глюкозоизомераз как в нативном состоянии, так и после воздействия на них денатурирующих агентов (табл. 2.45).

Таблица 2.45

Молекулярная масса

Продуцент глюкозоизомеразы натнвного фермента после обработки доде-цнлсульфатом натрия Предполагаемое число субъединиц

Lactobacillus brevis 74

(по данным Е. Т. Тулеуовой и др.,

1980)

Lactobacillus xylosus ТИА 6-9

(по данным К. Яманакн и др., 1977)

Streptomyces griseoiuscus S-41

(по данным Т. Касумн и др.,

страница 123
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
верстак чертеж
купить в москве мяч для фристайла
стул промышленный сп-04
купить деревянную подставку для ножей

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(24.02.2017)