химический каталог




Технология ферментных препаратов

Автор И.М.Грачева

лазы, а глю-козооксидаза образуется в следовых количествах.

Выделение ферментов. Выделение каталазы можно проводить методом сорбции на оксиде алюминия из нативной культуральной жидкости или из ультраконцентрата. Каталаза сравнительно легко (на 90—95%) элюируется с сорбента 0,1 М фосфатным буфером при рН 6,8. Далее ее можно осаждать изопропиловым спиртом в соотношении 1 : 1,2 и затем высушивать. Активность препарата составляет 80—90 % исходной. В производственных условиях при глубинном культивировании P. vitale можно получать препарат с каталазной активностью до 1 300—1 500 ед. на 1 мл культуральной жидкости, содержащей до 0,12—0,14% белка и около 1,5—1,8% сухого вещества. Готовая культуральная жидкость имеет рН около 8. При промышленном производстве целесообразно использовать методы ультрафильтрации, так как они позволяют не только сконцентрировать ферментный раствор, но и очистить его от низкомолекулярных балластных веществ. Из ультраконцентрата культуральной жидкости каталазу можно извлечь методом сорбции и а оксиде алюминия или других содержащих алюминий сорбентах (например, каолине). Затем каталазу элюируют с сорбента и подвергают традиционным методам очистки и кристаллизации.

Препараты каталазы в промышленных условиях в нашей стране получают на основе глубинной культуры P. vitale Pidop. et Bi-lai с использованием сорбционных и ультрафильтрационных методов. Препараты выпускаются в сухом виде. Промышленные препараты каталазы P. vitale обладают высокой активностью — 1 г препарата содержит 4—8 млн. ед. активности и удельную активность до 20 млн. ед. на 1 г белка. Здесь за единицу каталазной активности принимается количество фермента, катализирующее разложение 1 мкмоля перекиси водорода за 1 мин при концентрации субстрата 0,01 М, рН 6,8 и температуре 0°С. Сухие препараты каталазы при температуре 3—6°С удовлетворительно сохраняют активность, годовая допустимая потеря активности составляет не более 20%. Препараты фасуются в стеклянные флаконы по 5 млн. ед„ которые герметически закрываются.

Есть ряд рекомендаций по использованию в качестве продуцента Aspergillus niger, в том числе в нашей стране. О. В. Кис-ляковой (1974) был предложен способ получения из глубинной и поверхностной культур A. niger 8 ряда препаратов, обладающих каталазной и глюкозооксидазной активностью на основе реальных промышленных сред (3—6 % раствора мелассы, освобожденного от фосфата; 0,2 % KN03 и 0,05 % MgSO,. Однако эта культура по продуктивности значительно менее перспективна по сравнению с P. vitale Pidopl. et Bilai.

284

является 35—50 °С. Если действие каталазы необходимо в течение длительного времени, то оптимальной является температура от 3 до 10°С.

Энергия активации, кДж/моль

75,0

49,0 17,6

7.1 19,3

6,1

Являясь эффективными катализаторами различных процессов, ферменты должны максимальнс снижать величину энергии активации катализируемых ими реакций. Анализ различных препаратов каталазы показывает, что энергия активации реакции разложения перекиси водорода различна и зависит от типа катализатора. Эта зависимость приведена ниже.

Катализатор

Самопроизвольная реакция в водном

растворе (без катализатора)

Платинированная платина

Каталаза нэ печени быка

Каталаза из эритроцитов

Каталаза нз дрожжей

Каталаза нэ P. vitale Pidolp. el Bilai

Наименьшей энергией активации обладают препараты из микроскопических грибов. Каталаза из дрожжей и печени быка имеет энергию активации почти в 3 раза больше. Можно считать, что каталаза из грибов наиболее эффективно катализирует реакцию разложения перекиси водорода.

1.8.6. Совместное получение препаратов глюкоэооксидазы и каталазы

Технологический процесс раздельного получения этих ферментов основан иа выращивании продуцента на среде, обеспечивающей максимальное накопление в культуральной жидкости одного из иих, что достигается определенным соотношением источников углерода и азота. При совместном получении в среде должно содержаться 6—10% сахара и 1,5% азотнокислого калия. Последовательность получения этих ферментов следующая. По окончании культивирования культуральиая жидкость имеет каталазную активность около 50—55 ед. на 1 мг белка и глюкозооксидазиую активность 40—42 ед. иа 1 мг белка. Далее культуральиую жидкость с рН около 3,5—4 после отделения мицелия подвергают обработке оксидом алюминия в статических условиях при интенсивном перемешивании. При этом значении рН из культуральной жидкости сорбируется до 95 % каталазы от содержания ее в культуральной жидкости, а глюкозооксидаза остается в культуральной жидкости, т. е. на этой стадии осуществляется разделение каталазы и глюкозооксидазы.

Оксид алюминия с сорбированной иа ней каталазой отделяют, а освобожденную от каталазы культуральиую жидкость подвергают дальнейшей обработке оксидом алюминия для сорбции глюкозооксидазы. Каталаза, сорбированная иа оксиде алюминия, под-286 вергается обработке 0,1 М фосфатным буфером с рН 6,8 при перемешивании, что обеспечивает элюцию до 95 % каталазы. Объем элюеита берут в 6 раз

страница 117
< К СПИСКУ КНИГ > 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 127 128 129 130 131 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141

Скачать книгу "Технология ферментных препаратов" (3.32Mb)


[каталог]  [статьи]  [доска объявлений]  [прайс-листы]  [форум]  [обратная связь]

 

 

Реклама
земельные участки к коттеджном поселке на новой риге
ландшафтный интерьер автокад
заказать доску объявлений в подъезд
гироскутер бу оликс алматы

Рекомендуемые книги

Введение в химию окружающей среды.

Книга известных английских ученых раскрывает основные принципы химии окружающей среды и их действие в локальных и глобальных масштабах. Важный аспект книги заключается в раскрытии механизма действия природных геохимических процессов в разных масштабах времени и влияния на них человеческой деятельности. Показываются химический состав, происхождение и эволюция земной коры, океанов и атмосферы. Детально рассматриваются процессы выветривания и их влияние на химический состав осадочных образований, почв и поверхностных вод на континентах. Для студентов и преподавателей факультетов биологии, географии и химии университетов и преподавателей средних школ, а также для широкого круга читателей.

Химия и технология редких и рассеянных элементов.

Книга представляет собой учебное пособие по специальным курсам для студентов химико-технологических вузов. В первой части изложены основы химии и технологии лития, рубидия, цезия, бериллия, галлия, индия, таллия. Во второй части книги изложены основы химии и технологии скандия, натрия, лантана, лантаноидов, германия, титана, циркония, гафния. В третьей части книги изложены основы химии и технологии ванадия, ниобия, тантала, селена, теллура, молибдена, вольфрама, рения. Наибольшее внимание уделено свойствам соединений элементов, имеющих значение в технологии. В технологии каждого элемента описаны важнейшие области применения, характеристика рудного сырья и его обогащение, получение соединений из концентратов и отходов производства, современные методы разделения и очистки элементов. Пособие составлено по материалам, опубликованным из советской и зарубежной печати по 1972 год включительно.

 

 



Рейтинг@Mail.ru Rambler's Top100

Copyright © 2001-2012
(09.12.2016)