ором (хроматограмма б) - очень плохое из-за неудачно выбранной конструкции дозатора. В табл. 2-4 сравнивается рассчитанная по указанным хроматограммам (рис. 2-7) эффективность разделения, полученная на одной и той же колонке, но с разными дозаторами.

В табл. 2-5 показаны максимальные вводимые объемы для Различных пиков при допустимом 5%-ном увеличении объема пика. Следует заметить, что приведенные в этой таблице зна30

Таблица з-j. Максимальный объем объема* пробы для пиков разного

Максимальный объем пробы, мкл Объем пика, мкл

0,3 I 10 100

3 30

а Предполагаете!, что проба вводится в ( увеличение объема пика 5%. иде идеального поршня. Допустимое

/ мим

?> Особенности аппаратуры

чения справедливы лишь в том случае, если отсутствует адсорбция компонентов неподвижной фазой, что имеет место, например, при эксклюзионной хроматографии. Если проба растворена в растворителе более слабом, чем подвижная фаза, то она вначале концентрируется в головной части колонки и лишь затем начинается ее элюирование. Следовательно, в этом случае вводимый объем может превышать допустимый расчет-: ный, к заметному размыванию пика это не приведет. И, наоборот, если проба растворена в растворителе более сильном, чем подвижная фаза, объем пробы должен строго соответствовать максимально допустимому расчетному. Наконец, если проба растворена в черзвычайио сильном растворителе, он может принять участие в самом процессе элюйроваиия, в результате чего время удерживания окажется меньше ожидаемзо-го. Поэтому пробу следует растворять в том же растворителе, который выполняет роль подвижной фазы или входит в ее состав, либо, что предпочтительнее, в более слабом растворителе. На рис. 2-8 изображена зависимость между наблюдаемыми объемами пиков и вводимыми объемами для разных растворителей при одном и том же количестве пробы.

ts

\ X

Рис. 2-8. Зависимость наблюдаемых объемов пиков от объема проб при использовании в качестве растворителя ацетоиитрила (о); смеси ацетоиитрила с водой в соотношении 70/30 (б) и 50/50 (а). Колонка из ПТФЭ 0,5 мм (внутр. диам.) х 150 мм; неподвижная фаза сил ика гель SC-01, модифици [ю ванный октадецилсиланом (ОДС).

^ О

го

объем кюветы 1 мкл, длина волны 250 нл Р UVI°EC=100-V;

Пики: 1 - бензол (1%), 2 - нафталин (0,05%) J - биЛит,, /ппю/. 4 - флуорен (0,01%). s - антрацен <&>;^?ритель t^ZpT™'

На рис. 2-9 показано влияние вводимого объема на эффективность разделения методом микро-ВЭЖХ на колонке размером 0,25 мм (внутр. диам.) х 98 мм [37]. Проба растворялась в более сильном растворителе. /Для соединений с к' > 2 наблюдалось небольшое уменьшение эффективности колонки, Даже если вводимый объем составлял всего 0,05 мкл. Следует также заметить, что, поскольку объем пика пропорционален

32

2. Особенности аппаратуры

пгпбенности аппаратуры

Рис. 2-9. Зависимость эффективности колонки от объема пробы. Колонка 0,25 мм (внутр. диам.) х 98 мм; подвижная фаза ацетонит-рил/аода (70/30); объемная скорость 2,2 мкл/мин.

I - бензол (к' = 1,2); 2 -бифенил (&' = 2.9), 3 - пирен «' = 7,3).

— 5s

II

e s

I*

? а_г *!§

s &

? о и I

3 к 1о ?

8 1 5 3 '

объему колонки, максимально допустимый вводимый объем зависит как от диаметра колонки, так и от ее длины.

Рис. 2-10 демонстрирует хорошую воспроизводимость вводимых объемов при применении крана-дозатора и характеристик микроколонок [35]. Авторы работы [35] приготовили четыре микроколонки и на каждой из них получили по три-четыре хроматограммы. На одной из этих колонок они выполнили последовательно 15 замеров. Как выяснилось, относительнее стандартное отклонение для высот пиков составляло всего 0,6%, несмотря на очень малый вводимый объем (0,02 мкл). Миниатюрный кран-дозатор ML-422 (JASCO) в сочетании с микроколонкой внутренним диаметром 0,25 мм дает минимальное размывание пиков.

2.3.5. Объем ячейки детектора

Для эффективного обнаружения узких пиков, выходящих из колонок малого диаметра, необходим детектор с достаточно малым объемом рабочей ячейки.

Если в ячейке детектора происходит полное перемешивание потока, вариацию, детектора ad2 в единицах объема можно выразить следующим образом:

ffl S

?3

= * 3 ?Si

а 5° i

J to I

(If

§ 8 §

I 8.5!

S3 z

as a

tills

к s s ж в * я 3

X •в' м о

! |«""

2. Особенности аппаратуры

?> Особенности аппаратуры

«5- VI

(18)

таблица 2-6. Максимальный объем ячейки детектора для пиков

разного объема8 ___

где Vd - объем ячейки детектора. При ламинарном потоке

?клад детектора определяется выражением

Максимальный объем ячейки, мкл

0,1

10

Объем пика, мкл

1 10 100

(19)

Ячейка детектора не может работать как идеальная камера смешения. В действительности происходит лишь частичное перемешивание раствора, вследствие чего реальный вклад ячейки детектора обычно представляет собой нечто среднее между этими двумя предельными ситуациями [13]. С увеличением скорости потока вклад детектора возрастает и приближается к верхнему пределу (Kd2). Эмпирически установлено, что,