сь при длине волны 190 нм. При работе с проточной кюветой длиной 10 мм, обычной для ВЭЖХ, детектировать при очень малых длинах воли (порядка 190 им) нельзя из-за заметного поглощения ацетонитрила, являющегося одним из компонентов подвижной фазы. Однако в микро-ВЭЖХ возможно прямое детектирование сахаридов даже иа длине волны 190 мм, поскольку поглощение ацетонитрила в элюате уменьшается примерно в 30 раз по сравнению с обычной проточной кюветой благодаря тому, что длина проточной микрокюветы объемом 0,3 мкл составляет всего 0,3 мм.

Проведено уникальное исследование по применению микро-ВЭЖХ для одновременного количественного определения в воде следов химических элементов - свинца, цинка и меди [27]. Ионы металлов экстрагировали из водной фазы хлороформом в виде диэтилдитиокарбаматных хелатов и экстракт вводили непосредственно в микроколонку для ВЭЖХ. Типичная хроматограмма представлена на рис. 7-38. Авторы этой работы пользовались описанным методом для определения ионов металлов в речной воде. Согласно их сообщению, результаты анализа хорошо согласуются с данными, полученными методом атомно-абсорбционной спектроскопии.

7.3. ПРИМЕНЕНИЕ ПОЛУМИКРО-ВЭЖХ

7.3.1. Введение

В полумикро-ВЭЖХ разделение проводится на колонках объемом примерно в 10 раз меньшим объема обычных колонок. Этот метод, иа первый взгляд, не имеет перед обычной ВЭЖХ столь очевидных преимуществ (меньшая стоимость и высокая чувствительность), как собственно микро-ВЭЖХ, в которой разделение ведется иа колонках объемом еще в 10 раз меньшим. Однако, если исходить из' особенностей ее практического применения, полумикро-ВЭЖХ имеет целый ряд преиму-ществ:

1. Полумикро-ВЭЖХ почти столь же проста, как и обычная ВЭЖХ, тогда как собственно микро-ВЭЖХ требует специальных навыков, особых методов и большой тщательности.

2. В режиме полумикро-ВЭЖХ нетрудно осуществить как градиентное элюирование, так и послеколоночную дериватиза-Цию разделенных соединений.

3. Колонки и приборы, предназначенные для полумикро-ВЭЖХ, выпускаются несколькими фирмами.

Эти преимущества способствуют широкому распространению метода в аналитических лабораториях. Кроме того, оии стимулируют переход от обычной ВЭЖХ к полумикро-ВЭЖХ.

196

Применение микромасштабной Дчд^-у

Изучение существующих тенденций показывает, что полумик-ро-ВЭЖХ быстро завоевывает все новые области, что, несомненно, объясняется главным образом ее тремя указанными выше преимуществами. В настоящем разделе мы опишем несколько наиболее интересных примеров практического применения полумикро-ВЭЖХ.

H0MS!

чтобы полумикроколонка обладала такой же эффективностью, как обычная, и чтобы коэффициент емкости у обоих колонок был одинаков. В противном случае при переходе к работе на полу микроколонке оптимальные условия разделения придется находить заново. Для тех лабораторий, в которых ВЭЖХ используется как рутинный метод, это совершенно нежелательно.

В примере, представленном на рис. 7-39, использовалась неподвижная фаза для обращенно-фазовой хроматографии. Что касается других материалов, получивших распространение в качестве неподвижных фаз, таких, как силикагель, силикагель, модифицированный аминопропильными группами, и пористый полистирольный гель, то проведенные исследования подтвердили, что эффективность и коэффициент емкости полумикроколонки внутренним диаметром 1,5 мм и обычной колонки для ВЭЖХ практически одинаковы.

5 Ю ТЕМЯ, МИН

5 Ю ВРЕМЯ, МИН

Рис. 7-39. Сравнение времен удерживания и эффективности колонок.

а. полумикро-ВЭЖХ. Насос FAMIUC-300 S; детектор UVIDEC-100-Ш; колонка MS-Finepak SIL Clg, 1,5 мм (внутр. диам.) х 25 см; подвижная фаза ацетонитрил/вода (75/25); объемная скорость 100 мкл/мин. Пики: / - нафталин, 2 - антрацен; б: обычная ВЭЖХ. Насос TRI ROTAR V; колонка Finepak SIL С] 8, 4,6 мм (внутр. днам.) х 25 см; объемная скорость 1,0 мл/мин; остальные условия те же.

Еще одна важная причина, стимулирующая переход аналитиков на полумикро-ВЭЖХ, - это высокая эффективность полумикроколонок. На рис. 7-39 показаны две хроматограммы одного и того же раствора, одна из которых получена на по-лумикроколонке внутренним диаметром 1,5 мм, а вторая - на обычной колонке диаметром 4,6 мм. Если в обоих случаях h3j садочный материал один и тот же, то для переноса условии обычной ВЭЖХ непосредственно на полумикро-ВЭЖХ нужно,

7.3.2. Анализ фармацевтических и биохимических объектов

На рис. 7-40 показана хроматограмма, полученная при исследовании методом полумикро-ВЭЖХ противосу дорожных средств. На полумикроколонке внутренним диаметром 1,5 мм, заполненной силикагелем, модифицированным группами С18, разделены фенобарбитал, фетиноин и карбамазепин. Для этих препаратов характерен узкий эффективный интервал концентраций в крови и весьма разнообразный у различных индивидуумов спектр метаболитов. Кроме того, избыточные дозы этих лекарственных средств могут давать различные вредные побочные эффекты. Поэтому определение их концентрации в крови имеет исключительное значение для установления оптималь