которая пригодна для. микро-ВЭЖХ на фторопластовой колонке внутренним диаметром 0,5 мм. Сочетание микро-ВЭЖХ с высокочувствительным флуоресцентным детектором позволяет добиться очень высокой чувствительности [21 ].

На рис. 7-28 показана хроматограмма, полученная при высокочувствительном детектировании многоядерных ароматических углеводородов. Из рисунка видно, что авторам работы удалось определить чрезвычайно малые (5 и 14 нг) количества искомых компонентов при весьма высоком отношении сигнал/шум.

На рис. 7-29 показана хроматограмма изомеров канцерогена нафтиламина, полученная с применением высокочувствительного детектирования. В данном эксперименте на микроколонке, заполненной силикагелем (5 мкм), удалось разделить очень малые количества а- и /3-нафтиламина (по 1,7 пмоль каждого). Детектирование осуществлялось флуоресцентным детектором.

Высокочувствительное определение витамина В2 показано на рис. 7-30. Авторам работы удалось обнаружить в пробе всего 0,15 пмоль искомого соединения при весьма высоком отношении сигнал/шум.

На рис. 7-31 представлена хроматограмма, полученная при высокочувствительном определении производных полиаминов. Существует мнение, что содержащиеся во многих биологических объектах полиамины служат регулирующим фактором » процессах синтеза белка и размножения клеток. Имеются также сообщения о возрастании концентрации полиаминов в моче пациентов с онкологическими заболеваниями. Все это потребовало разработки высокочувствительных методов определения полиаминов в биологических объектах. В рассматриваемом примере полиамины переводились во флуоресцирующие производные путем обработки специальным флуоресцирующим реагентом (флуорескамином), который присоединялся к аминогруппам молекул полна мнов. Полученные флуоресцирующие соединения разделялись и определялись методом микро-ВЭЖХ. В драненение микромасштабной ВЭЖХ 1В5

одном опыте удавалось определять очень малые (до 0,2 пмоль) количества полиаминов.

Рис. 7-28. Высокочувствительное определение многоядерных ароматических углеводородов с применением

флуоресцентного детектора.

Колонка 0,5 мм (внутр. днам.) х 16,7 см; неподвижная

фаза Fine SlL Cjg; подвижная фаза ацетоннтрил/днстиллнрованная вода (80/20);

объемная скорость

6 мкл/мнн; длина волны возбуждающего излучения 254 нм, флуоресцентного излучения 430 им.

40

10 20 30

Время, мин

Пнкн: 1 - антрацен <7 пг), 2 - хризен (14 пг), $ - перилен (9 пг), 4 -бенз(а)пнрен <5 пг).

ж.

применение миквомасштабной ВЭЖХ

5 Ю

Время, лик

Рис. 7-30. Высокочувствительное определение витамина В2. Колонка фторопластовая 0,5 мм (внутр. диам.) х 17,9 см; неподвижная фаза нук-леосил NH2; подвижная фаза ацето нитрил/фосфатный буфер (0,005 моль/л) (75/25); объемная скорость 6 мкл/мин; длина волны возбуждающего излучения 365 им, флуоресцентного излучения 530 им: проба 15 пмоль витамина В2.

О 10

7.2.11. Применение сжиженных газов в качестве подвижной фазы

Вязкость сжиженных газов должна в принципе быть меньше вязкости растворителей обычных для ВЭЖХ. Следовательно, если роль подвижной фазы выполняет сжиженный газ, эффективность хроматографического разделения должна повыситься. Использовать низкокипящие растворители в микро-ВЭЖХ можно в том случае, если давление в системе превышает давление паров подвижной фазы. В табл. 7-1 приведены коэффициенты диффузии бензола в сжиженных алканах, рассчитанные по уравнению Оуано [22, 23]. Величина ВЭТТ зависит от коэффициента диффузии, и при одной и той же скорости подвижной фазы она тем меньше, чем больше коэффициент

Применение микромасштабной ВЭЖХ

189

колонками в ЖХ лучшие результаты дают подвижные фазы с более низкомолекулярными алканами.

Типичные хроматограммы, полученные при разделении многоядерных ароматических углеводородов (ПАУ) с н-бутаном и пропаном в качестве элюентов, приведены на рис. 7-32. Удерживание разделяемых компонентов зависит как от структуры молекул растворителя, так и от числа атомов углерода в его молекуле. Если растворителем служит алкан с разветвленной цепью, удерживание больше, чем при применении растворителя нормального строения с тем же числом атомов углерода в молекуле.

На рис. 7-33 показано разделение ароматических аминов и ПАУ на колонке, заполненной полистирольным гелем, со сжиженным диметиловым эфиром в качестве подвижной фазы [24]. Удерживание разделяемых веществ зависит прежде всего

диффузии растворителя. Как уже указывалось в гл. 3 (разд. 3.2), при работе с открытыми безнасадочными капиллярными

190_

Применение микоомасштабной ВЭжу

применение микромасштабной ВЭЖХ

Ж

Рис. 7-33.- Разделение ароматиче-. ских соедииеииий с применением диметилового эфира в качестве подвижной фазы. Колонка 0,26 мм (внутр. диам.) х 103 мм; неподвижная фаза полистирольный гель (TSK-GEL G1000P); объемная скорость 1,4 мкл/мин (а) и 2,8 мкл/мин (0); детектор УФ, 235 им (а) и 265 им (6).

S OS

время, лшк

а - последовательно элюируют-ся анилин, ОС-нафтиламии и N-фе-нил-С?-иафтиламин; б: 1 - бензол, 2 - нафталин